Northern blot实验（一）
Northern blot 可用于：（1）检测不同组织、器官；（2）生物体不同发育阶段以及胁迫环境或病理条件下特定基因的表达样式。
如northern blot被大量用于检测癌细胞中原癌基因表达量的升高及抑癌基因表达量的下降，器官移植过程中由于免疫排斥反应造成某些基因表达量的上升，Northern blot还可用来检测目的基因是否具有可变剪切产物或者重复序列。
| 实验方法原理 | 将RNA样品通过变性琼脂糖凝胶电泳进行分离，再转移至尼龙膜等固相膜载体上，用放射性或非放射性标记DNA或RNA特异性探针对固定于固相膜上的mRNA进行杂交，洗膜去除非特异性结合杂交信号，经放射自显影或现色反应，对杂交信号进行分析。将杂交的mRNA分子在电泳中迁移位置与标准分子量分子进行比较，即可知道细胞中特定的基因转录产物的大小；对杂交信号的强弱比较，可以知晓该基因表达mRNA水平的强弱。 |
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| 实验材料 | |
| 试剂、试剂盒 | |
| 仪器、耗材 | |
| 实验步骤 | 一、RNA转移与固定
3. 1xSSC淋洗尼龙膜后滤纸吸干，夹在2层干净滤纸中80℃烤箱烘烤2小时。
4. RNA染色，干燥的尼龙膜先于5%冰乙酸中室温浸泡15 min。
二、预杂交、杂交及显色
2. 100 ml blocking buffer工作液封闭30 min。
3. 100 ml antibody buffer（1：5000）孵育30 min。
4. Washing buffer洗膜（15 minx2）。
5. 20 ml detection buffer 平衡2~5 min。
6. 将尼龙膜置于10 ml color-substrate solution 棕色瓶中，避光数min至1天（出现颜色时不要摇动）。
8. 照相记录，80℃烤干，储存。
9. 扫描计算EGFR基因扩增的倍数。 收起 |
| 注意事项 | 1. 避免RNA酶污染，防止RNA降解。
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