LiveTissue 活肿瘤组织冻存技术常见问题解答
1. 可以冻存什么样大小的肿瘤组织？
可以冻存肿瘤患者的手术组织和穿刺组织，也可以保存PDX鼠的传代肿瘤组织。
2. 新鲜的肿瘤组织怎样保存和运输？
应浸于我们的组织运输液或完全培养基内，0~4℃低温保存，于2小时内低温运输到实验室立即冻存处理。鉴于手术组织容易酸化腐烂，普通的组织运输液和完全培养基不能长期保存肿瘤组织，所以我们在开发能长期保存（~7天）组织的运输液，届时我们将通过微信公众号发布该产品。
3. 冻存处理前组织标本要注意什么？
获得肿瘤病人的知情同意；保存好原始完整病历档案；确认无HBV、HCV、HIV等病毒感染，防止处理过程中造成标本间交叉污染，确保实验人员的安全防护。
4. 冻存肿瘤组织需要多久操作时间？
做一批实验，1~4份穿刺的肿瘤组织需要30分钟左右，1~3份手术组织需要60~90分钟左右。
5. 组织冻存和复苏的操作注意事项和关键步骤有哪些？
成功的冻存和复苏必须注意快速降温和快速升温。即，组织移入、移出液氮时，要在液氮上操作，并且速度要快。
6. 组织切片模具和刀片能重复使用吗？怎样消毒？
组织切片模具可以重复使用，可以用75%酒精浸泡并晾干后使用，也可以浸泡后高压灭菌再使用。刀片为无菌分装一次性使用。
7. 有些肿瘤组织非常有弹性，不容易切片怎么办？
按照我们的教学视频，通常需要2个刀片固定肿瘤组织。如果由于组织弹性太大而不容易固定，可以用3个刀片固定，或者将组织切割成更小体积，再用刀片固定。
8. 细胞冻存通常要求冰上操作，为什么肿瘤组织冻存说明书上要求26℃处理？这样会对组织造成损伤吗？
任何冻存方法对细胞或者肿瘤组织都会造成不同程度的损伤。组织冻存不仅要冷冻保存多层细胞，还要保存细胞间质，选择合适的冷冻时间和温度很重要。如果温度太低，渗透速度太慢需要更长的处理时间，温度太高则冷冻保护剂有一定毒性。我们选择26℃是因为在这个温度下，冻存液中的冷冻保护剂在相对短的时间内能够快速渗透到细胞和细胞间质中。
9. 组织冻存是把组织浸在冻存液V1、V2后直接存放液氮罐吗？
不是。本试剂盒的方法是将组织切成均匀的薄片，再使用冻存液梯度处理组织薄片使冷冻保护剂渗透至组织内，多余的冷冻液需要弃去。冻存的是组织，不包含大量的冻存液。
10. 液氮处理后，组织会从金属的组织支架上掉下来吗？
不会，组织会固定在支架上。
11. 组织支架上为什么有很多小孔？
为了快速热传导，玻璃化冻存需要急剧降温。
12. 可以先把组织及组织支架放入冻存管后，再把冻存管放入液氮中急剧降温处理吗？
不可以，冻存管的热传导效率差，不能达到玻璃化冷冻要求的急剧降温速度。
13. 为什么组织支架要在液氮中浸润5分钟以上？
为了使肿瘤组织降温充分和均匀。
14. 液氮冷冻处理后的组织能放到-80℃冰箱后，再转入液氮罐吗？
不能。液氮冷冻处理后的组织<-135℃是玻璃化冷冻状态，如果放到超低温冰箱，造成温度上升，组织细胞内会形成冰晶，造成组织坏死，不能继续使用。
15. 组织复苏时为什么要摇一摇？
成功的复苏也应当遵循快速升温的原则，摇一摇有利于冻存组织快速、均匀地升温。摇动后，组织也会从支架上脱落。
16. 复苏时每次都要更换一个培养皿吗？
操作人员务必确保不同病例的组织不能混用培养皿。单个病例的标本可使用一个培养皿，只需将培养皿中的液体弃净。
