关注公众号

关注公众号

手机扫码查看

手机查看

喜欢作者

打赏方式

微信支付微信支付
支付宝支付支付宝支付
×

T淋巴细胞转化试验的详细介绍

2022.2.13

  样本要求

  肝素抗凝血5ml,室温

  参考值

  形态学检测法:60.1%±7.6%。 3H-TdR渗入法:0~2%。 刺激指数(SI)>2为有意义。

  临床意义

  1、T淋巴细胞在体外培养过程中受有丝分裂原刺激,可转化成为体积较大的母细胞。计数转化的细胞可反映机体的细胞免功能。

  2、细胞免疫功能缺陷或低下者,其转化率可明显低于正常,如运动失调性毛细血管扩张症。此外,恶性肿瘤、霍奇金病、淋巴瘤、淋巴肉芽肿、重症真菌感染、重症结核转化率可低于正常值,T淋巴细胞转化率增高见于唐氏综合征。

  3、估计疾病的预后和疗效,恶性肿瘤和慢性白色念珠菌病患者,经免疫因子或免疫增强剂治疗后可变为正常,反之,则预后不良。

  注意事项

  检测方法可分为3H-TdR掺入法、形态学法和MTT法等。

  1、3H-TdR掺入法 T淋巴细胞受PHA或特异性抗原刺激后,发生有丝分裂,细胞进入S期,且伴随新的DNA合成,若此时加入氚标记的胸腺嘧啶核苷3H-TdR,则3H-TdR可被淋巴细胞作为合成DNA的原料摄入,根据3H-TdR的摄入量,可判断细胞的增殖程度。培养细胞用液体闪烁仪测量,记录每分钟脉冲数(cpm),通过计算,得出刺激数(SI),以此表示转化能力。计算公式为SI (刺激指数)=PHA刺激管cpm均值/对照管cpm均值。

  2、形态学法 T淋巴细胞与有丝分裂原(PHA)或特异性抗原置37℃孵育72h,淋巴细胞会发生一系列形态变化,如细胞体积增大、胞浆深染、胞核增大、染色质疏松、核仁明显等,此即为淋巴母细胞,然后通过显微镜计数,测出淋巴母细胞的百分率。

  3、MTT法 MTT为淡黄色偶氮唑盐,活细胞特别是增殖细胞的线粒体脱氢酶活性增高,通过线粒体能量代谢过程,可将MTT代谢形成蓝紫色的甲臜沉积于细胞内或细胞周围,而且甲臜形成量与细胞增殖程度呈正相关,因此通过比色分析就能判断出淋巴细胞的增殖程度。计算公式为:SI(刺激指数)=PHA刺激组吸光度(A)均值/对照管组吸光度(A)均值。

推荐
关闭