蛋白质紫外分光测定实验
蛋白质紫外分光测定实验
实验方法原理 |
由于蛋白分子中酪氨酸和色氨酸残基的苯环含有共轭双键,因此蛋白质具有吸收紫外线的性质,吸收高峰在280nm波长处。在此波长范围内,蛋白质溶液的光吸收值(A280)与其含量呈正比关系,可用作定量测定。 由于核酸在280波长处也有光吸收,对蛋白质的测定有干扰作用,但核酸的最大吸收峰在260nm处,如同时测定260nm的光吸收,通过计算可能消除其对蛋白质测定的影响,因此溶液中存在核酸时必须同时测定280nm及260nm之光密度,方可通过计算测得溶液中的蛋白质浓度。 利用紫外线吸收法测定蛋白质含量的优点是迅速、简便、不消耗样品,低浓度盐类不干扰测定。因此,在蛋白质和酶的生化制备中(特别是在柱色谱分离中)广泛应用。此法的缺点是(1)对于测定那些与标准蛋白质中酪氨酸和色氨酸含量差异较大的蛋白质,有一定的误差,(2)若样品中含有嘌呤、嘧啶等吸收紫外线的物质,会出现较大的干扰。 不同蛋白质和核酸的紫外吸收是不同的,即使经过校正,测定结果也还存在一定的误差。但可作为初步定量的依据。 |
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试剂、试剂盒 | 标准蛋白溶液 待测蛋白溶液 |
实验步骤 |
一、试剂 展开 |