外周血细胞瑞氏(Wright)染色及计数实验——涂片法
实验方法原理 | 瑞氏染料中有美蓝和伊红两种成分,前者为碱性,后者为酸性,它们与细胞内的各种物质具有不同的亲和力,使其显现出不同的色调。血细胞核由去氧核糖核酸和强碱性的组蛋白、精蛋白等形成核蛋白。这种强碱性的物质与瑞氏染料中的酸性染料伊红有亲和力,所以染成红色;核蛋白中还有少量的 弱酸性蛋白,它们又与染液中的碱性染料美蓝起作用而染成蓝色,但含量太少,蓝色反应极弱 ,故核染色呈现紫红色。较幼稚的细胞之胞浆和细胞核之核仁中含有酸性物质,它们与染料中的碱性染料美蓝有亲和力,故染成蓝色。 |
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实验材料 | |
试剂、试剂盒 | |
仪器、耗材 | |
实验步骤 | 1. 制作血涂片 (1)滴一小滴血(约5 ul)于干净玻片上,推片与玻片应呈约30°角,用力均匀而较快,且不可复推。 (2)如血滴较小,推得较慢,角度小于30°,所制涂片较薄。 (3)如血滴较大,推得较快,角度比30°大时,则所制涂片较厚。 2. 将标本放平(最好置于一个固定架上),用滴管将染液滴于涂片上,可用滴管将染液驱散,使其布满整个涂片。 3. 染液布满整个涂片后,稍等片刻或立即加入缓冲液,并使缓冲液与染液混均匀。 4. 染液与缓冲液的比例 (1)染液量要充足,否则染液很快蒸发,将染料沉淀于细胞上。 (2)染液与缓冲液的比例为1:2~4左右比较合适。 (3)稀释度越大,染色时间越长,细胞着色较好,反之则越差。 5. 染色时间:视具体情况而定,一般约需10~30分钟。 6. 冲洗:用自来水冲洗涂片上之染料。 7. 显微镜检查:待自然干燥后用光学显微镜检查。 展开 |
注意事项 | 1. 制作血涂片应避免气泡,厚度适中。 2. 染液与缓冲液的比例要适中。 |
其他 | 一、正常血细胞形态
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