血涂片染色
（一）瑞氏染色法
1﹒原理
瑞氏（Wright）染液由酸性染料伊红和碱性染料亚甲蓝溶解于甲醇而成。不同的细胞因所含化学成分不同，对各种染料的亲和力也不同，其中，碱性（阳离子）染料能与细胞内酸性物质，如核酸（DNA和RNA）、核蛋白、嗜碱性颗粒、中性颗粒等阴离子结合染成蓝灰色。酸性（阴离子）染料能与细胞内碱性物质，如血红蛋白、嗜酸性颗粒等阳离子结合染成橘红色。
2﹒试剂
（1）瑞氏染液：
含瑞氏染料1.0g、纯甲醇（AR级以上）600ml、甘油15ml。将全部染料放入清洁干燥的乳钵中，先加少量甲醇慢慢地研磨（至少30min），以使染料充分溶解，再加一些甲醇混匀，然后将溶解的部分倒入洁净的棕色瓶内，乳钵内剩余的未溶解的染料，再加入少许甲醇细研，如此多次研磨，直至染料全部溶解，甲醇用完为止。再加15ml甘油密闭保存。
（2）磷酸盐缓冲液（pH 6﹒4～6.8）：
含磷酸二氢钾（K H2PO4）0.3g、磷酸氢二钠（Na2HPO4）0.2g、蒸馏水加至1000ml。配好后用磷酸盐溶液校正pH，塞紧瓶口贮存。如无缓冲液可用新鲜蒸馏水代替。
3﹒操作
（1）画线：
待血涂片干透后，用蜡笔在两端画线，以防染色时染液外溢。
（2）加染色：
将玻片平置于染色架上，滴加染液（Ⅰ液）3～5滴，使其迅速盖满血涂片。
（3）加缓冲液：
约0.5～1min后，滴加等量或稍多的缓冲液（Ⅱ液），轻轻摇动玻片或用吸球对准血涂片吹气，使染液充分混合。
（4）冲洗玻片：
5～10min后用流水冲去染液，待干。
方法学评价
1﹒干扰因素
（1）标本部位：
不能采用的标本：①示指或拇指血液。②感染部位血液，如甲沟炎。③耳垂部位血液，含单核细胞太多。不能使用肝素抗凝标本。
（2）载片质量：
要制备良好的血细胞涂片，玻片必须清洁、干燥、无尘。新玻片应在清洁液中浸泡过夜或已用过的玻片应在60℃清洁液中加热20min，然后用水冲洗，最后用蒸馏水冲洗。边缘破碎、表面有划痕的玻片不能再用。使用玻片时，只能手持玻片边缘，切勿触及玻片表面，以保持玻片清洁、干燥、中性和无油腻。
（3）涂片质量：
①干燥性：干透后方可固定染色，否则细胞尚未牢固地吸附在玻片上，在染色过程中容易脱落。②血膜分布：低倍镜下观察血涂片应厚薄适宜，细胞不重叠，头尾及两侧有一定空隙，一些体积大的特殊细胞常在血涂片尾部出现。如有可能，干燥后血涂片先用中性树胶封片后再观察，不仅能长期保存血涂片，而且观察效果更佳。
（4）染液质量：
新鲜配制的染液偏碱，染色效果较差，经在室温下贮存一定时间，亚甲蓝逐渐转变为天青B后方可使用，这一过程称染料成熟。放置时间愈久，天青愈多，染色效果愈好，但必须盖严瓶口，以免甲醇挥发或氧化成甲酸。甲醇必须用AR（无丙酮）。染液中也可加中性甘油3ml，防止甲醇挥发，使细胞染色较清晰。
（5）操作规范：
应规范操作，操作不当会影响血片质量。
血片染色操作不当后果
2﹒质量保证
（1）涂片制作：
质量不佳包括：①不规则间断和尾部太长，因推片污染、推片速度不连续、载玻片太脏造成。②有空洞，因载玻片污染脂肪、油脂造成。③白细胞和血小板尾部分布不规则，因制片技术差造成。④涂片太长或太短，因推片角度不佳造成。⑤涂片没有尾部，因血滴太大造成。⑥涂片很短：因血滴太小造成。⑦涂片没有边缘空隙，因推片太宽造成。⑧有细胞退变现象，因固定延迟、固定时间太短、甲醇污染造成。
（2）涂片厚度：
影响因素包括：①血滴大、血黏度高、推片角度大、推片速度快则血涂片厚，反之则血涂片薄。②对血细胞比容高、血黏度高患者应采用小血滴、小角度、慢推，而贫血患者则应采用大血滴、大角度、快推。③推片时如用力过猛，白细胞容易破损。
（3）染色色泽：
质量不佳包括：①太蓝，因涂片太厚、冲洗时间太短、中性水pH太高、染色时间太长、稀释染液重复使用、贮存染液暴露于阳光造成。②太红，因冲洗时间太长、中性水pH太低、贮存染液质量不佳、涂片干燥前加封片造成。③太淡，因染色时间太短、冲洗时间太长造成。④染料沉积，因染料沉淀、染液未过滤、涂片太脏造成。⑤蓝色背景，因固定不当、涂片未固定贮存过久、使用肝素抗凝剂造成。
（4）染色时间：
染色需要时间的长短与染液浓度、室温及细胞量有关。染液淡、室温低、细胞多则染色时间长；反之，可减少染色时间。必要时可增加染液量或延长时间。冲洗前，应先在低倍镜下观察有核细胞是否染色清楚，核质是否分明。每批染色液和缓冲液均需试染，以便掌握染色时间和加缓冲液比例。血细胞中各种有机物质，特别是蛋白质，对染色环境中氢离子浓度十分敏感。染色环境偏酸，增强伊红着色，红细胞、嗜酸性粒细胞染色偏红，核呈淡蓝色或不着色；染色环境偏碱，增强天青着色，所有细胞呈灰蓝色，嗜酸性颗粒呈暗褐，甚至棕黑色；中性颗粒偏粗呈紫黑色，故应使用新鲜配置的中性水。如血涂片上有染料颗粒沉积，可用甲醇冲洗2次，并立即用水冲掉甲醇，待干后复染。染色太蓝，在含1%硼酸95%乙醇溶液冲洗2次，用中性水冲洗，待干镜检。染色过淡，可以复染。复染时应先加缓冲液，创造良好染色环境后加染液，或加染液与缓冲液混合液，不可先加染液。
瑞‐吉染色法 瑞‐吉染色法
1﹒原理
瑞‐吉染色法（Wright‐Giemsa stain）与瑞氏染色法基本相同。吉姆萨染色法提高了噻嗪染料的质量，加强了天青的作用，对细胞核和寄生虫着色较好，结构显示清晰，而胞质和中性颗粒则着色较差。
2﹒试剂
（1）Ⅰ液：
含瑞氏染料1g、吉姆萨染料0.3g、甲醇500ml、中性甘油10ml。将瑞氏染料和吉姆萨染料置洁净研钵中，加少量甲醇，研磨片刻，再吸出上液。如此连续几次，共用甲醇500ml。收集于棕色玻璃瓶中，每天早、晚各摇3min，共5d，以后存放1周即能使用。
（2）Ⅱ液：
即磷酸盐缓冲液（pH 6﹒4～6.8）。包含无水磷酸二氢钾6.64g、无水磷酸氢二钠2.56g，加少量蒸馏水溶解，用磷酸盐调整pH，加水至1000ml。
3﹒操作
操作步骤同瑞氏染色法，只是染色时将瑞‐吉复合染液Ⅰ液和Ⅱ液替代瑞氏染液和磷酸盐缓冲液。
