非损伤微测技术
实验概要
本实验利用非损伤微测技术对拟南芥的钠钾离子流进行了测定及数据分析。
实验原理
非损伤微测技术起源于产生了众多诺贝尔奖获得者的美国MBL实验室。非损伤微测技术离子选择性微电极的工作原理：Ca2 离子选择性微电极通过前端灌充液态离子交换剂(Liquid Ion Exchanger，LIX)实现选择性。
该微电极在待测离子浓度梯度中以已知距离dx进行两点测量，并分别获得电压V1和V2。两点间的浓度差dc则可以从V1、V2及已知的该微电极的电压/浓度校正曲线计算获得。D是离子特异的扩散常数(单位：cm-2.sec-1)，将它们代入Fick第一扩散定律公式：J0=-D.dc/dx，可获得该离子的移动速率(picomol. cm-2.sec-1)即：每1s通过一个平方厘米的该离子/分子摩尔数(10-12级)。
实验步骤
1. 非损伤微测技术测定离子流速的试剂配制
2. 离子流测定
K离子流测定：
1) 将拟南芥种子铺于正常和缺素的培养基上萌发；
2) 先4℃成层处理3d，放置于22℃光照培养箱培养7d；
3) 观察测定野生型、突变体和超表达株系中的K离子流。
Na离子流测定：
1) 将拟南芥种子铺于MS培养基上萌发；
2) 先4℃成层处理3d，放置于22℃光照培养箱培养7d；
3) 然后转移至含有200mM NaCl的MS培养基上处理4d。
4) 观察测定野生型、突变体和超表达株系中的Na离子流。
3. 数据处理
1) 数据准备：从原始数据中找到Nernst Slope Nernst Intercept(选择合适的校正的结果)；从原始数据中找到origin作为V0，origin-X(或者是origin-Y，origin-Z)作为dv，新建EXCEL表格，复制V0和dv到EXCEL共两列数据，保存为.csv格式文件；
2) 软件登录：进入网上Mageflux输入网址http：//www.xuyue.net/mageflux/打开网页，点击图标中START进入；输入已创建好的名称和密码登录；
3) 添加项目：登录之后，点击Project Admin.进入项目管理界面；点击添加一个新项目Add a New Project；
4) 选择参数：填写Project Name和Description，然后选择电极测定的位置，即电极相对所测样品的位置，为了操作的方便，一般电极在右边。之后选择坐标，一般都是原点减去X，Y，Z；最后选择离子的参数，即所测的离子种类(Name )，电极运动距离/采样规则(dr)，选择效率(eff)，扩散系数(D0)，校正斜率(Slope)，校正截距(Intercept)。然后点击Save Changes；
5) 上传文件：在左上角的Select a Project里选择之前的项目名称，点击Go；进入该项，点击上传文件，即点击Upload New CSV File for Flux J Calculation；点击浏览，把保存好的所要计算的.CSV上传，点击Submite the File；
6) 成功上传：显示文件已成功上传，“点击这里进行计算”，计算的数据便显示在右边栏；
7) 打开数据：“点击下载/在线查看刚刚生成的数据文件-J111.CSV"，打开或者保存文件；
8) 数据显示：最右边的一栏即为已换算的流速，Flux J；
9) 导出数据：把文件保存或者复制数据，用绘图软件做图即可。
