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细胞膜透性改变的测定(植物组织逆境伤害程度的测定)

2019.4.23

实验概要

利用电导仪法测定细胞膜透性改变来评估植物组织逆境伤害的程度。

实验原理

植物组织受到逆境伤害时,由于膜的功能受损或结构破坏,而使其透性增大,细胞内各种水溶性物质包括电解质将有不同程度的外渗,将植物组织浸入无离子水中,水的电导将因电解质的外渗而加大,伤害愈重,外渗愈多,电导度的增加也愈大。故可用电导仪测定外液的电导度增加值而得知伤害程度。

主要试剂

NaCl 溶液

主要设备

电导仪,天平,温箱,真空干燥器,抽气机,恒温水浴锅,注射器。

实验材料

植物叶片

实验步骤

1. 制作标准曲线  如需定量测定透性变化,可用纯 NaCl 配成 0 、 10 、 20 、 40 、 60 、 80 、 100 μg/mL 的标准液,在 20 ~  25 ℃恒温下用电导仪测定,可读出电导率。以电导率为纵坐标, NaCl 量为横坐标做标准曲线。 
  2. 选取小麦或其他植物在一定部位上生长叶龄相似的叶子若干,剪下后,先用纱布拭净,称取两份,各重 2 g 。 
  3. 一份插入小杯中放在 40 ℃恒温箱内萎蔫 0.5 ~ 1 h  ,另一份插入水杯中放在室温下做对照。处理后分别用蒸馏水冲洗两次,并用洁净滤纸吸干。然后剪成长约 1 cm  小段放入小烧杯中(大小以能够容纳电极为度),并用玻棒或干净尼龙网压住,在杯中准确加入蒸馏水 20 mL ,浸没叶片。 
  4. 放入真空干燥器,用抽气机抽气 7 ~ 8 min 以抽出细胞间隙中的空气。重新缓缓放入空气,水即被压入组织中而使叶下沉。 
  5. 将抽过气的小烧杯取出,放在实验桌上静置 20 min ,然后用玻棒轻轻搅动叶片,在 20 ~ 25 ℃恒温下,用电导仪测定溶液电导率。 
  6. 测过电导率之后,再放入 100 ℃沸水浴中 15 min ,以杀死植物组织,取出放入自来水冷却 10 min ,在 20 ~ 25 ℃恒温下测其煮沸电导率。   
计算结果:
按下式计算相对电导度: 相对电导度(L)= S1/S2   相对电导度的大小表示细胞膜受伤害的程度。
  由于室温对照也有少量电解质外渗,故可按下式计算由于低温或高温胁迫而产生的外渗,称为伤害度(或伤害性外渗)。   伤害度(%)= ((Lt-Lck)/(1-Lck)) *100   式中  Lt—处理叶片的相对电导度;   Lck—对照叶片的相对电导度。   在电导度测定中一般应用去离子水,若制备困难可用普通蒸馏水代替,但需要设一空白试管(蒸馏水作空白),测定样品时同时测定空白电导值,按下式计算相对电导度:
相对电导度(L)= (S1-空白电导度)/(S2-空白电导度)



 

注意事项

1.CO2在水中的溶解度较高,测定电导时要防止高CO2气源和口中呼出的CO2进入试管,以免影响结果的准确性。
  2.温度对溶液的电导影响很大,故S1和S2必须在相同温度下测定。 
  3. 整个过程中,叶片接触的用具必须绝对洁净(全部器皿要洗净),也不要用手直接接触叶片,以免污染。 
  4. 各处理和对照的待测液的体积要一样。 
  5. 测定后电极要清洗干净。 

【附注】 DDS-11A 型电导率仪的使用方法

附    件   (共1个附件,占1KB)

asss

DDS-11A 型电导率仪的

1KB下载  


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