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组织培养再生

2019.11.11

步骤一:接种

组织培养的接种是指将灭过菌的材料,在无菌的情况下,切成小块,放入培养基的过程。科研、生产部门的接种工作,多在无菌室或超净工作台上进行,中学可制作接种箱,在箱内进行接种。接种的方法步骤如下:

①在无菌室或接种箱中放好接种时所需要的酒精灯、贮存70%酒精和棉球的广口瓶、各种镊子、接种针、解剖刀、手术剪、火柴、培养基等。

②在无菌室或接种箱内用紫外灯灭菌(无菌室照射20~50分钟,接种箱照射15分钟)。

③放入已灭菌的接种材料(用培养皿盛取)。同时,操作人员用酒精棉球擦手,并对接种工具用酒精灯火焰烧灼。

④用手术刀片将材料切割成若干片段,并迅速接种入培养基中。接种时,锥形瓶(或试管)应斜向火焰,在酒精灯火焰附近操作。

⑤材料接种好后,将锥形瓶瓶口在酒精灯火焰上转动烧一遍,盖好瓶盖,注明材料名称及接种日期。

材料接种后,应置于26~28℃的培养室中进行培养。

步骤二:植株诱导

本阶段是组织培养中最重要的一环。在培养基中植物  激素的作用下,外植体通过三条途径迅速增殖,这就是侧芽增殖、诱导不定芽的形成和诱导胚状体的形成。

侧芽增殖

种子植物的每个叶腋中通常都存在着腋芽,在一定条件下可以使它生长。现在知道顶端优势抑制侧芽生长,可被外源的细胞分裂  素打破,所以在利用侧芽增殖这条途径时,培养基中几乎都要加入细胞分裂素(有时也加入少量生长素)。由于细胞分裂素的持续作用,侧芽不断分化和生长,逐渐形成芽丛。如果反复切割和转移到新的培养基上继代培养,就可在短期内得到大量的芽。

侧芽增殖的主要优点是能保持遗传的稳定性,因为茎尖的细胞常是均一的二倍体细胞,它不易受培养条件的影响而发生变异,也易于保持嵌合体的性状。目前已有近百种植物可以用这种方法进行繁殖,如草毒(Fragaria ananassa Duch.)、苹果、葡萄(Vitis vinifera L.)、唐菖蒲(Gladiolus gandavensis Houtt.)、非洲菊、月季(Rosa chinensis Jacq.)、甜菜(Beta vulgaris L.)和凤梨。


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