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绝对定量滴度测定

2020.5.25

慢病毒活性滴度用什么单位?

看TU!看TU!看TU!

TU=transducing units,即每毫升中含有的具有生物活性的病毒颗粒数。其他的VG/mL,VP/mL都是所有病毒颗粒数,死的活的都算上,一片虚假繁荣,请自由玩儿去!

慢病毒活性滴度怎么标定最准?

绝对定量!绝对定量!绝对定量!

又绝对又定量的方法,准到不要不要的!再说了,这“绝对定量”是医疗级病毒产品的公认滴度检测方法,诺华、Juno,这些CarT大佬们都用!不准?不准的话FDA能认吗?

复杂又昂贵的方法,为了准,咱们忍啦!

  1. 标准品检定绘制标准曲线,精确定量病毒基因组DNA拷贝数

2.测定插入细胞基因组的5’LTR—3’LTR病毒基因组拷贝数

3.工具细胞 293T基因组中的病毒特征单拷贝基因A和宿主特征单拷贝基因B

4.TU=N*C/V=(初始细胞/感染病毒体积)×(2×A基因拷贝/B基因拷贝),计算感染效率

5.不要反转录,不要受RNA降解或反转录效率影响

6.如果病毒有荧光或者抗性,再结合表型联合判断

准!准!准!重复性杠杠滴!

处女座实验狗都无法抵抗的滴度标定方法!

慢病毒滴度标那么准,有用吗?

有人问我,为啥我的细胞用慢病毒一感就死?

为啥我的细胞用慢病毒感染后会出现小黑点?

很可能是,过感染啦!过感染啦!过感染啦!

有木有先做预实验确定细胞的MOI?有没有根据病毒滴度准确计算病毒用量?

越是高浓度高纯度的病毒,越是需要精确计算滴度,以避免感染不足或者过量感染,保证最好的细胞状态,以继续下游实验,这样才能省时省力省病毒啊!


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