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食物过敏原的检测和定量方法--ELISA

2021.11.22

  ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay)

  现在ELISA是食品工业和政府食品管理部门进行食品中潜在过敏原检测和定性最常用的方法,用这种方法特定的蛋白或抗原可以与特定的酶标记的抗体键合后用显色反应来定性和定量,靠标准曲线来计算抗原的含量。

  ELISA的检测方式有两种:竞争式(competitive)ELISA法和夹心式(sandwich)ELISA法,后者是最常用的食物过敏原的免疫评价方法。

  夹心式ELISA方法是用固定在固定相上的捕获抗体,样品中特定的蛋白被第一个抗体捕获,然后被第二个特定的以酶标记的抗体检出,而第二个抗体与被分析物键合,从而形成夹心式。与第二个抗体相连的酶与特定的底物反应形成有颜色的产物,它的吸收峰与被分析物的浓度线性相关。此种方法用于多种食物过敏原的检测,有多种检测工具包上市。

  竞争式ELISA方法是测定相对较小蛋白质优先选择的方法。它包含一个键合在固定相上的固定抗原,血清和一定比例稀释样品提取物(作为抑制剂)培养后添加到固相抗原上。如果样品中没有抗原出现,酶标记的抗体表现出与固定相上键合的抗原的最大键合能力,形成的有颜色的产物的最大吸收。因为样品中的抗体抑制酶标记的抗体与固定的抗原的键合,吸收峰与样品中抗原的浓度成反比。有报道,使用竞争式ELISA方法对某些食物过敏原的检测极限可以低至0.4μg kg-1。

   纤维素试纸测试

  纤维素试纸测评是近年来发展起来可以代替ELISA方法的一种测试方法,它具有价格低、快速、方便携带、无须仪器设备、操作简便等特点。目前,试纸测试只是定性方法,有改进的用于测定鸡蛋中过敏原的试纸测定方法,具有高度的专一性和灵敏度,检测限低至0.02 mgkg-1。


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