本发明公开了一种粗肋草的组织培养繁殖方法，旨在提供一种繁殖速度快，可在短期内获得大量试管苗，并且对母株损伤不大，能保持母株优良性状的组织培养繁殖方法。本方法包括选择生长旺盛的粗肋草幼茎为外植体，对外植体进行消毒，在诱导培养基中进行不定芽的诱导，再将不定芽接入增殖培养基中进行继代增殖，当芽高3-5厘米时，切下接种到生根培养基上生根培养;当试管苗长至6-7厘米高时，在自然光照下炼苗7-10天;取出试管苗，洗掉根部培养基，栽入由沙、珍珠岩、泥炭土等混合的基质中，经常规培养后得到栽培苗。本发明可以为市场提供大量的粗肋草试管苗。