用蛋白质组学方法绘制磷酸化位点图谱
方案1 用带有 Fe(Ⅲ) 和 Ga(Ⅲ)的 IMAC 纯化磷酸化多肽
方案2 在 MALDI 分析之前或之后对磷酸化多肽进行碱性磷酸酶处理
方案3 结合固定化金属离子亲和介质和 MALDI-TOF-MS 直接分析方法对磷酸化多肽进行特征分析实验
方案4 离线 micro-IMAC 富集磷酸化蛋白实验
方案5 用 μLC-ESI-MS/MS 对磷酸化多肽进行分析
方案6 MALDI-MS确定酪氨酸磷酸化位点实验
方案7 用 ESI-MS 确定丝氨酸、苏氨酸的磷酸化位点实验
方案8 用 ESI-MS 确定组氨酸磷酸化位点实验
| 实验材料 | 胶内或溶液分离的目标蛋白 |
|---|---|
| 试剂、试剂盒 | 乙酸 EDTA FeCl3 甲酸 甲醇 蛋白裂解酶 溶剂 |
| 仪器、耗材 | 台式离心机 去盐树脂 IMAC 树脂 MALDI 探针 质谱仪 加样吸头 加样器 |
| 实验步骤 |
一、IMAC 树脂的制备
二、多肽样品的制备
三、用 NanoscaleIMAC 纯化磷酸化多肽
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