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高效液相色谱法定量分析依据是什么

2020.4.21

　　一、液相色谱的分离原理

　　当流动相中携带混合物经过固定相时，其与固定相发生相互作用，由于混合物中各组分在性质和结构上的差异，与固定相之间产生作用的大小，强弱不同，随着流动相的移动，混合物在两相间经过反复多次的分配平衡，使得各组分被固定相保留的时间不同，从而按一定次序由固定相中流出。

　　二、定性

　　1、利用已知标准样品定性

　　①利用保留值定性

　　利用标准样品对未知化合物定性是最常用的液相色谱定性方法之一。由于每一种化合物在相同的色谱条件下，其保留值具有特征性，因此可以利用保留值进行定性。

　　②利用加入法定性

　　将标准样品加入到试样中，观察各组分色谱峰的相对变化（看峰面积是否变大）

　　2、与其他分析仪器连用

　　包括GC-MS、LC-MS、HPLC-DAD等

　　3、双检测器定性

　　同一种检测器对不同种类的化合物的响应值是不一样的，相反，不同的检测器对同一种化合物的响应也是不同的。所以当某一被测化合物同时被两种或两种以上检测器检测时，两个或几个检测器对被测化合物的检测灵敏度比值是与被测化合物的性质密切相关的，可以用来对被测化合物进行定性分析，这就是双检测器定性体系的基本原理。

　　三、定量

　　1、归一化法

　　归一化法

　　要求试样中所有组分都能分离并有响应。由于液相色谱所用检测器为选择性检测器，对很多组分没有响应，因此液相色谱法较少使用归一化法。

　　2、外表法

　　也叫标准曲线法，外表法是以待测组分纯品配置标准试样和待测试样同时作色谱分析来进行比较而定量的，可分为标准曲线法和直接比较法。

　　特点：操作简单、计算方便，结果的准确度主要取决于进样量的重现性和操作条件的稳定性。

　　3、内标法

　　内标法是比较精确的一种定量方法。它是将已知量的参比物加到已知量的试样中，那么试样中参比物的浓度为已知；在进行色谱测定后，待测组分峰面积和参比物峰面积之比应该等于待测组分的质量与参比物质量之比，求出待测组分的质量，进而求出待测组分的含量。

　　内标法要求：

　　1、试样中不含有该物质。

　　2、与被测组分性质比较接近。