想要实现大鼠卵巢颗粒细胞原代培养，必须完成这些步骤
大鼠卵巢颗粒细胞分离自PMSG诱导后3天的大鼠的卵巢组织，颗粒细胞是卵巢的主要功能细胞，其增殖与分化直接影响着卵泡的生长启动、发育、排卵、黄体形成以及甾体激素分泌等卵巢功能活动。细胞形状呈圆形或椭圆形。
大鼠卵巢颗粒细胞原代分离培养：
1、材料准备：取21-25天雌性SD大鼠，每日皮下注射PMSG40IU,48H后颈椎脱臼法处死。将大鼠置于75%乙醇中浸泡消毒灭菌。
2、取材：在无菌条件下迅速剖取卵巢放入预冷的PBS中，除卵巢周围的组织及表面包膜。含双抗的PBS多次洗涤后置于预冷的DMEM-F12培养基中。在解剖显微镜下用1ml注射器针头刺破卵泡，使大鼠卵巢颗粒细胞释放进入DMEM-F12培养基，离心管内吹打分散成单个悬浮细胞。800r/min离心5min,去除上清。
3、消化：加入0.25%胰蛋白酶-0.02%EDTA1ml,重悬细胞，于37℃，5%CO2培养箱中消化60min，期间从培养箱取出用吸管反复吹打悬液2-3次，直至组织消化为黏液状、颗粒细胞团块分离即可，加入含10%胎牛血清的培养液以1:1比例终止消化，200目不锈钢细胞筛过滤。
4、离心：收集过筛细胞液，800r/min离心5min,加PBS洗涤滤液弃上清，收集细胞。
5、接种：加DMEM-F12完全培养基至离心后疏散的细胞团中，重悬细胞，制成单细胞悬液。台盼蓝染色，计数。将细胞稀释成浓度为3.0×105ml的细胞悬液，接种于六孔板中，在37℃，5%CO2培养箱中预培养48H后换液1次，去除未贴壁细胞，此后隔日换液1次。
大鼠卵巢颗粒细胞注意事项：
1、培养基于4℃条件下可保存3-6个月。
2、在细胞培养过程中，请注意保持无菌操作。
3、传代培养过程中，胰酶消化时间不宜过长，否则会影响细胞贴壁及其生长状态。
