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聚丙烯酰氨凝胶电泳的实验结果分析

2023.2.08

1、电泳条件的选择

为了选择血清蛋白电泳较合适的条件,我们分别对单体浓度、双体浓度、配制凝胶时所用不同正离子、各种电压、二甲氨基丙腈的浓度、过硫酸铵的浓度等条件进行了试验。根据以上试验结果,我们在分离血清蛋白时选用的条件是:单体浓度6.25-6.5%,双体占总丙烯酰胺量的4-5%,正离子采用三羟甲基氨基甲烷,二甲氨基丙腈及过硫酸铵浓度分别为0.25%及0.7%。电泳电压以7-10V/cm较为合适。但电泳时间较长,约2-3小时,室温低时可以电压稍高。如果室温较高则可以在冰箱中进行电泳。

2、人血清及其酒精分划部分的凝胶电泳

采用上述条件我们进行了正常人血清的凝胶电泳。一般可以分成15-20条区带。根据两向电泳方法比较了纸电泳和凝胶电泳各区带的相对关系。纸电泳上的a:区带在凝胶电泳中可被分离成10条以上区带。但纸电泳中d,区带的一部分则与凝胶电泳中自蛋白区带相重合。在正常人血清中后白蛋白(PA)、转铁蛋白(Tr)和触珠蛋白(HP)均有不同的型。较纯晦白蛋白和丙种球蛋白部分,在凝胶电泳中可见明显的其他蛋白区带。

3、放射病狗血清蛋白电泳的观察

放射病动物血清蛋白的改变可以在纸电泳中观察到。一般认为狗在照射后吻球蛋白有增高。用凝胶电泳观察可以得到更深入的资料。正常狗血清的凝胶电泳图谱大致人相似。狗受致死量照射后第九天有明显变化。我们用3-10型光 谱仪用光密度计将电泳图谱进行了扫描。由于仪器的限制光缝最小只能达到0.5mm,从而影响了其分辨力。但与正常血清对比可以见到其改变的情况,这远比纸电泳中所见更为明显。

4、在分离正常人尿DNase时的凝胶电泳

观察用葡聚糖凝胶分离人尿中DNase时可以除去大部分其他蛋白质和杂质。但分离所得的制品用凝胶电泳观察还可以见到五条以上的蛋白质区带。将凝胶条在未染色前置于含大分子DNA的琼脂平板上,在37℃温箱中保温2-3小时,再用5%三氯醋酸加至如此处理过的琼脂板上,可以看到乳白色本底上出现被酶水解后的透明斑点。将凝胶条用氨黑染色后显示其蛋白区带的位置。二者比较就可以确定具有酶活性的成分的相应电泳位置。我们的试验中观察到人尿DNase在凝胶电泳中至少被分离成二条以上有酶活性的区带。说明有同功酶的可能。应用这一方法可以较深人地观察体液中酶的情况。同时也说明可以用凝胶电泳来指示生物制剂制备过程中纯化的情况。


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