酵母菌随即孢子分析实验
实验材料 酵母菌
试剂、试剂盒 2-疏基乙醇乙醇酵母裂解液
仪器、耗材 超声发生器探头离心机
实验步骤
1. 制备可供剖分四分体用的细胞。如果孢子在平板上形成，可用牙签挑起孢子放入装有5 ml 水的50 ml 烧瓶中；如果孢子在液体培养基中形成，可将1 ml 培养液加入5 ml 水中。然后加入0.5 ml 酵母裂解酶-20T溶液和10 μl 2-巯基乙醇，于30℃摇床缓缓摇动下培养过夜。
2. 加入5 ml 1.5%NP-40溶液，将混合悬液移到一支一次性的15 ml 试管中，冰浴15 min。
3. 超声波处理之前要清洁超声探头。先用清水洗，再用乙醇冲洗，然后将超声探头插入装有混合悬液的试管，并尽可能地插到液体中，但不要触到管底或管壁。以50%~70%的满功率超声30 s，置冰浴中2 min，重复2次。
4. 以1 200 g 离心孢子10 min，吸去或倒去上清，再用5 ml 1.5%NP-40重悬沉淀，在旋涡混合器上剧烈振荡，重复2次。
5. 按步骤3超声（重复），最后一次超声后检查孢子。
6. 1 200 g 离心孢子10 min，吸去或倒掉上清，然后用5 ml 水重悬，在旋涡混合器上剧烈振荡混匀，重复1次。
7. 用血细胞计数板计算10倍稀释处理的孢子悬液，用水稀释直到孢子浓度为103孢子/ml 每个平板涂布100 μl 孢子稀释液，然后于30℃培养3天。
8. 影印平板，筛选目的孢子菌落。
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