酵母菌随即孢子分析实验
将减数分裂产物从子囊中释放出来,通过超声破裂,直接铺在琼脂平板上,孢子菌落可以通过影印平板法来筛选目的基因型。
实验材料 | |
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试剂、试剂盒 | |
仪器、耗材 | |
实验步骤 | 1. 制备可供剖分四分体用的细胞。如果孢子在平板上形成,可用牙签挑起孢子放入装有5 ml 水的50 ml 烧瓶中;如果孢子在液体培养基中形成,可将1 ml 培养液加入5 ml 水中。然后加入0.5 ml 酵母裂解酶-20T溶液和10 μl 2-巯基乙醇,于30℃摇床缓缓摇动下培养过夜。
2. 加入5 ml 1.5%NP-40溶液,将混合悬液移到一支一次性的15 ml 试管中,冰浴15 min。
3. 超声波处理之前要清洁超声探头。先用清水洗,再用乙醇冲洗,然后将超声探头插入装有混合悬液的试管,并尽可能地插到液体中,但不要触到管底或管壁。以50%~70%的满功率超声30 s,置冰浴中2 min,重复2次。
6. 1 200 g 离心孢子10 min,吸去或倒掉上清,然后用5 ml 水重悬,在旋涡混合器上剧烈振荡混匀,重复1次。 |