葡聚糖凝胶G系列使用说明
葡聚糖凝胶G系列使用说明
1 化学和物理性质
葡聚糖凝胶是一种珠状的凝胶，含有大量的羟基，很容易在水中和电解质溶液中溶胀。亲水基质使其非特异性吸附最小化，并在生物分子分离期间得到较高的回收率。G型的葡聚糖凝胶有各种不同的交联度，因此它们的溶胀度和分级分离范围也有所不同。葡聚糖凝胶的溶胀度基本上不因盐和洗涤剂的存在而受影响。
葡聚糖凝胶有不同的粒度。超细级的葡聚糖凝胶是用于需要极高分辨率的柱色谱和薄层色谱。粗级和中级的凝胶用于制备性色谱过程，可在较低的压力下获得较高的流速。另外，粗级也可用于批量工艺。
2 产品说明
产 品 名 称
分离范围（球蛋白）
应 用
葡聚糖凝胶 G-10
<700
缓冲液交换、脱盐，分离小分子，去除小分子
葡聚糖凝胶 G-15
<1500
缓冲液交换、脱盐，分离小分子，去除小分子
葡聚糖凝胶 G-25
1000-5000
工业上脱盐及交换缓冲液
葡聚糖凝胶 G-50
1000-30000
多肽分离、脱盐、清洗生物提取液、分子量测定
葡聚糖凝胶 G-75
2000-70000
蛋白分离纯化、分子量测定、平衡常数测定
葡聚糖凝胶 G-100
2000-120000
蛋白分离纯化、分子量测定、平衡常数测定
葡聚糖凝胶 G-150
5000-300000
蛋白分离纯化、分子量测定、平衡常数测定
葡聚糖凝胶 G-200
5000-600000
蛋白分离纯化、分子量测定、平衡常数测定
3 使用方法
葡聚糖凝胶G系列产品以干粉形式存在，使用前必须溶胀，在膨胀期间应避免过度搅拌，因为它可能破坏填料，不要使用磁力搅拌器。
3.1 填料的准备
（1）将填料在过量去离子水或缓冲液中，室温条件下膨胀3小时，或用热水膨胀10分钟。洗脱缓冲液不应含有高粘度的试剂。溶胀过程中，如果上层有碎胶，请去除。
（2）将溶胀好的填料，所有的缓冲液等材料平衡至实验操作温度。
3.2 装柱
（1）检查层析柱所有部件，特别是过滤网，密封圈，螺旋塞是否紧密，玻璃管是否干净和完整。
（2）将柱内及柱子底端用水或缓冲液润湿并保持一小段液位（液面略高于滤膜），务必使底端无气泡。
（3）用玻璃棒引导匀浆沿着柱内壁一次性倒入柱内，注意勿使产生气泡。打开柱子出液口，使凝胶在柱内自由沉降，连结好柱子顶端柱头。
（4）打开蠕动泵，让缓冲液用使用时流速的1.33倍的流速流过，使柱床稳定（注意压力不要超过填料最大耐压）。
3.3平衡
上样前平衡层析柱至少5-10个柱体积直到记录仪基线变得平稳为止（流出液的PH值和等电点等于上柱的Buffer的PH值和等电点）。
3.4 上样
样品一定要离心或过滤后（0.45um）上样。
凝胶过滤的上样量一般为不大于5%的柱床体积，我们建议初次上样控制在1-2%的柱床体积，视分离情况可以调整；脱盐时上样量可以达到20%的柱床体积，柱高的选择也与分离要求相关，柱高过高的凝胶层会引起较大的反压，应当尽可能避免。难分离物质要有一定柱高和流速控制，脱盐时高径比为5：1即可。
3.5 洗脱方法
可以用无盐水，也可以采用上柱时的缓冲液洗脱；在上柱Buffer中加入NaCl等梯度洗脱或盐梯度洗脱也可以完全分离纯化。
3.8 在位清洗（CIP）
凝胶使用十次后作一次CIP，目的是去除柱床内沉淀的及顽固残留的蛋白。方法是以40cm/h用0.1 M氢氧化钠洗四个柱体积，再以至少三个柱体积平衡缓冲液再生。
注意事项：
1.上样之前，样品必须经过膜过滤及去除色素，否则杂质及色素会被吸附到填料上，影响填料的正常使用。
2.在使用过程中，避免使用高浓度的强酸强碱，酸和碱的浓度应低于0.15摩尔。碱会使流速变慢。
3.不同的样品，吸附和洗脱方法不相同，可以根据相关的文献进行。
