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ELISA的优点和影响因素

2022.3.30

ELISA检测技术的优点
近二十几年来,免疫学分析方法发展很快,特别是在使用标记了的抗原和抗体的分析技术以后,使原来许多经典的分析方法在敏感性和特异性方面都不能相比。继50年代的免疫荧光(IFA)和60年代的放射免疫(RIA)分析技术之后,在70年代初期又建立了用酶来标记抗原或抗体的分析技术。由于酶的高效生物催化作用,一个酶分子在数分钟内可以催化几十几百个底物分子发生反应,产生了放大作用,使得原来极其微乎其微的抗原或抗体在数分钟后就可被识别出来,这种技术被称为酶联免疫吸附试验法(Enzyme—Linked Immunosorbent Assay,ELISA),本法自70年代初期由VAN WEEMEN、SCHUARS.ENGVALL及PERLMARN等相继分别报道后,现已引起广泛重视。
ELISA法是免疫诊断中的一项新技术,现已成功地应用于多种病原微生物所引起的传染病、寄生虫病及非传染病等方面的免疫诊断。也已应用于大分子抗原和小分子抗原的定量测定,根据已经使用的结果,认为ELISA法具有灵敏、特异、简单、快速、稳定及易于自动化操作等特点。不仅适用于临床标本的检查,而且由于一天之内可以检查几百甚至上千份标本,因此,也适合于血清流行病学调查。本法不仅可以用来测定抗体,而且也可用于测定体液中的循环抗原,所以也是一种早期诊断的良好方法。因此ELISA法在生物医学各领域的应用范围日益扩大,可概括四个方面:
1、免疫酶染色各种细胞内成份的定位。
2、研究抗酶抗体的合成。
3、显现微量的免疫沉淀反应。
4、定量检测体液中抗原或抗体成份。
酶联免疫吸附试验法以其灵敏度高(可达 ng 甚至pg 水平),特异性好等优点,在生命科学各领域得到广泛应用,它已迈出医药、临床领域,步入农业、渔业、畜牧业和食品加工业。

下面将ELISA 法与免疫荧光(IFA)和放射免疫(RIA)的各自优缺点作一简要的比较
三种方法的优缺点比较:
方法种类 ELISA RIA IFA
敏感性 高 高 低
特异性 取决于抗原制备 取决于抗原制备 较高
重演性 尚满意 尚满意 尚满意
结果判断 客观 客观 有主观因素
抗原制备 较容易或复杂 较容易或复杂 较容易
结合物制备 正在标准化 已标准化 已标准化
在野外条件下用于大
量人群标本的普查 可以 困难 尚可以
分析自动化 可以 可以 困难
主要设备 酶标比色计 粒子计数器 荧光显微镜
试验成本 低 高 较高
试剂半衰期 长 短 长
对人的危害性 无或很少 有 无或很少
主要检测对象 抗体或抗原 抗原 抗体或抗原
应用范围 小的诊断实验室 大的中心实验室 小的诊断实验室

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