蛋白纯化时候,柱子进气的解决方法
有一次本人用HiPrep™ 26/60 Sephacryl S-200 HR以2ML/MIN的速度做GF纯化.
结果一时开小差
,柱子严重进气
.严重到什么程度呢,60厘米的柱子上方20CM都空了,下面40CM则全都是气泡.本人发现后,立刻停泵,并经专家建议后采取以下措施:
1:将原来与柱子底部相连的增压器拆下,连到顶部.
2:翻转进液方向,由底部向顶部以最大速度输液,我记得好象是用了该柱子的最大流速.
结果,柱子恢复如常,其后的纯化曲线也未发现可测飘移.
讨论:
步骤一的目的是增加柱头压,使空气在液体中的溶解度上升.
步骤二则使入侵的气体原路返回,减少气体对柱子的进一步损害.
建议,大家如果遇到类似情况一定不要慌,先把机器停下来再说.1万多的柱子应该还是没那么脆弱的.
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