细胞的原代培养实验
实验方法原理
细胞培养(Cell culture)是模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。近年来，广泛地应用于分子生物学、遗传学、免疫学、肿瘤学、细胞工程等领域，发展成一种重要生物技术，并取得显著成就。由体内直接取出组织或细胞进行培养叫原代培养。原代培养细胞离体时间短，性状与体内相似，适用于研究。一般说来，幼稚状态的组织和细胞，如：动物的胚胎、幼仔的脏器等更容易进行原代培养。
实验材料 胎大鼠
试剂、试剂盒 1640培养液PBS胰蛋白酶EDTA混合消化液乙醇
仪器、耗材 手术器械平皿培养瓶吸管离心管煤气灯烧杯超净工作台二氧化碳培养箱倒置显微镜
实验步骤
1. 取材
用颈椎脱位法使胎大鼠迅速死亡。然后，把整个动物浸入盛有75％乙醇的烧杯中数秒钟消毒，取出后放在大平皿中携入超净台。用消过毒的剪刀剪开用碘酒和乙醇再次消毒后的皮肤，剖腹取出肝脏或肾脏，置于无菌平皿中。
2. 切割
用灭菌的PBS 液将取出的脏器清洗三次，然后用眼科手术剪刀仔细将组织反复剪碎，直到成1 mm3 左右的小块，再用PBS 清洗，洗到组织块发白为止。移入无菌离心管中，静置数分钟，使组织块自然沉淀到管底，弃去上清。
3. 消化、接种培养
吸取0.25％胰蛋白酶一0.02％EDTA 混合消化液1 ml，加入离心管中，与组织块混匀后，加上管口塞子，37 ℃水浴中消化8～10 分钟，每隔几分钟摇动一下试管，使组织与消化液充分接触，静止，吸去上清，向离心管中加入5～10 ml 含10％小牛血清的1640 培养基，用吸管吹打混匀，移入二个培养瓶中，置于二氧化碳培养箱中培养。
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