沉淀反应实验原理、材料和实验方法（2）
三 双向扩散
【 实验原理 】
双向免疫扩散是指抗原和抗体在同一凝胶内部扩散，彼此相遇后形成特
异性的沉淀线。该反应是将抗原和抗体加入同一凝胶中两个相隔一定间距的小孔内，使两者进行相互扩散。当抗原和抗体浓度之比相适宜时，彼此相遇形成一白色弧型沉淀线。
【 实验材料 】
1% 琼脂糖，玻片或培养皿，凝胶打孔器（直径 3mm ），水浴箱， 10ml
吸管， 5 μ l 微量加样器，抗原，抗体。
【 实验方法 】
1 ）取一张玻璃片，用水冲洗干净，再用少量 75% 乙醇冲洗，晾干后置于水平台备用。
2 ）将 1% 琼脂糖融化， 56 ℃水浴中保温。
3 ）将 1% 凝胶约 3ml 铺于玻片上，待凝固后打孔，直径 3mm ，间距 10mm 。（如图所示）
4 ）中心孔加 5 μ l 抗体，周围孔内每孔加 5 μ l 抗原样品（抗原抗体均需预先做系列稀释以获得适宜的抗原抗体比例）。
5 ）将凝胶板置于湿盒，室温过夜（ 24h 以上）后观察结果。
【 结果分析 】
1 ）阳性结果为在抗原孔与抗体孔之间出现沉淀线。若出现几条沉淀线表明抗原与抗体均不是单一组分。
2 ）此法可用来比较两个抗原的相关性。当两种抗原的决定簇完全相同时，则与抗体形成的沉淀线相吻合；若两抗原的决定簇完全不同时，则与抗体形成的沉淀线呈不相关的交叉线；若两种抗原有部分决定簇相同时，则与抗体形成呈部分交叉的沉淀线。
四 火箭电泳
将抗原抗体反应置于一定的电场中进行，能使抗原抗体反应更加快速，灵敏。根据方法的不同，主要有火箭电泳，对流免疫电泳，交叉免疫电泳等。
【 实验原理 】
火箭电泳是把单向扩散技术与电泳技术结合起来。抗原在含有抗体的琼
脂糖凝胶中电泳时，在电场的作用下，抗原向一个方向移动并逐步与凝胶中的相应抗体结合形成沉淀峰。沉淀峰的高度与抗原的浓度成正比。
【 实验材料 】
1% 琼脂糖，玻片或培养皿，凝胶打孔器（直径 3mm ），水浴箱， 10ml
吸管， 5 μ l 微量加样器，已知抗体，标准抗原，待测抗原，电泳仪。
【 实验方法 】
1 ）取一张玻璃片，用水冲洗干净，再用少量 75% 乙醇冲洗，晾干后置于水
平台备用。
2 ）将 1% 琼脂糖融化， 56 ℃水浴中保温
3 ）取 15ml 琼脂糖加到 56 ℃预热的玻璃管中，加入适量的抗体（约 200ml ）
充分混匀后平铺于玻璃片上。
4 ）待凝胶凝固后打孔（直径 3mm ）
5 ）将系列稀释的标准抗原和待检抗原分别加到凝胶孔中，每孔 5 μ l
6 ）在 35v/cm 电场中电泳 30min 。
7 ）根据标准稀释抗原的峰高绘制标准曲线，计算待检样品的抗原含量。
【 结果分析 】
1 ）本实验主要用于抗原的测定（只能测定μ g/ml 以上的含量）。计算方法同单向扩散，均需先根据系列稀释的标准抗原的峰高作出标准曲线，然后在标准曲线上找出待检抗原对应的浓度。
2 ）可用于检测血清免疫球蛋白或分泌型 IgA 及补体 C3 等的含量。
3 ）一般来说，抗原应放在负极的一侧，因为多数蛋白性抗原在碱性电泳缓冲液中带负电，在电场中向阳极运动。
