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环状沉淀反应实验

2019.4.06

环状沉淀反应广泛应用于法医学的血迹鉴别和食物掺假的测定。通常这些可疑材料作为抗原,用标准抗血清加以鉴定。它具有用材少的优点,例如衣服等物品上的血迹用生理盐水洗下就可作为抗原进行检查。

实验方法原理


可溶性抗原例如细菌的提取物,血清、病毒溶液等与相应抗体反应,在有电解质的情况下,会产生细微的沉淀称为沉淀反应。


沉淀反应与凝集反应的原理基本相同,所不同的是使用的抗原是可溶性的,正因为是可溶性抗原,其单个抗原分子体积小,在单位体积的溶液内所含抗原量多,其总反应面积大,出现反应所需要的抗体量多,因此,试验时是稀释抗原,而不是稀释抗体。引起沉淀反应的抗原称为沉淀原,相应抗体称为沉淀素。


环状沉淀反应是使抗原与抗体在沉淀管内形成交界面,然后在此交界面处出现一环状的乳白色沉淀物(图 1)。出现此环状反应的抗原最高稀释度即为沉淀素的效价。


图 1 环状沉淀试验

A. 有沉淀环的阳性管;
B. 阴性管 Ag:抗原;Ab:抗体


实验材料

马血清(抗原)兔抗马免疫血清(抗体)正常兔血清

试剂、试剂盒

生理盐水

仪器、耗材

沉淀管(内径约 2.5~3.0 mm长约 30 mm)小试管毛细吸管吸管

实验步骤

1. 取 1:25 的马血清 1 ml,用倍比稀释法在小试管中按下表稀释成各种浓度。


1*1,2*2分别表示自第 1 管,自第 2 管中吸取 1 ml,余类推。


2. 将 9 个干燥而清洁的沉淀管插在试管架的小孔上,使直立。


3. 用毛细吸管吸取 1:2 的兔抗马免疫血清,加入沉淀管底部,每管约两滴。


4. 用另一毛细吸管吸上面已稀释好的马血清(抗原),按下表加入各管。


从最高稀释度加起,加入时,沿管壁徐徐加入,使与下层兔抗马免疫血清之间形成界面,切勿摇动。第 8 管加生理盐水,第 9 管加稀释兔血清以作对照。


5. 于室温中静置 15~30 分钟后观察结果,在两液面交界处看有无白色环状沉淀出现。


6. 结果记录的方法是凡有白色环状沉淀者,记「+」号,没有沉淀者,记「-」号。最大稀释度的抗原与抗体交界面之间还有白色沉淀者,此管的稀释度即为沉淀素的效价。


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