影响质粒提取的因素有哪些
关于抽提质粒：
1） 抽提质粒时，加入 Solution II和 III后要求轻柔混匀。我个人觉得不用这样，只要不是
非常剧烈，可以快速混匀。尤其可以运用在一次抽提多管质粒的时候，这样可以快速，而且
效果一点也不差。
2） 抽提质粒时，用无水乙醇沉淀的时间可以由实验操作者来决定，如果时间充裕可以 30
min，否则 8-10 min 也可以。至于温度，个人觉得-20℃好于常温。如果加入可醋酸钠，会较
容易形成盐类杂质，所以时间短一些更好！
3） 质粒小提如果是用作鉴定或酶切，不必进行酚仿抽提，将溶液 1，2，3 离心后的清液移
入一个新的 1.5ml 离心管中，再次离心 3-5 min，小心取出上清液后，直接沉淀，不必担心
DNA 切不开，我已经这样使用一年多，没出过什么问题。当然这样的质粒不很干净，但是
做鉴定足够了。尤其是实验室女同胞们，可以减少酚仿的侵害，而且节省时间。
4）有时沉淀东西，由于沉淀量很少，离心完之后不知道到底有没沉淀下来东西，由于量很
少，不好观察，所以离心时建议按特定的方向放置离心管，这样你就可以在离心之前确定沉
淀该沉淀到管子的大致部位，这样离心后就可直接观察那有没有沉淀，避免满管子找，另外
看沉淀时可以对光看，这样就是颗粒状的细小沉淀也能看见的，我觉得我们制备好了一批感
受态，最好马上转化一种已知质粒。与此同时，取一点感受态接种到含抗性的固/液体培养
基培养来做对照。这样第二天即可以知道这批感受态是否还有外源质粒，又可以知道这批感
受态转化效率的高低。如果合格，那以后就可以放心使用！因为我也曾经遇到其实是因为感
受态不好而导致试验不成功，但是当时不知道，结果费时费力。
5）提取质粒的时候，最后一步的酒精挥发很关键，基本上是其后续的酶切反应的决定性因
素。所以这一步尽量挥发长一点时间，最好是空调吹热风，或是 37℃温箱放长一点的时间，
我试过室温过夜，酶切很好。
6）在做克隆鉴定的时候经常需要在酶切鉴定前进行 PCR 鉴定，每次配置 PCR 反应液很繁
琐，可以将其配置类似 Kit 的形式，按你需要的反应体系列表，然后放大 100 倍配置 100×
主反应液（100 次反应），其中含 Buffer，Mg2＋，dNTPs，但不含引物和 Taq 酶，然后可以
10×分装或一管储存在-20℃，在需要的时候拿出融开，然后按所需的 PCR 反应个数吸取相
应的倍数，再补加相应反应倍数的 Taq 和引物，混匀后分装，这样做的好处如下： 1）节省
时间；2）避免每次反应加样不均的可能；3）大大减少 PCR假阳性的产生。
