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质粒提取的注意事项

2022.5.21

1、利用氯霉素抑制染色体的复制,而不抑制质粒的复制这一特点,在低拷贝质粒(如pUC19)的培养过程中添加氯霉素可以大大提高得率。

2、RNA 的去除,首先是使用 RNase 消化。在溶液 I 中加入高浓度的 RNase A (100ug/ml),或者用含 25ug RNase A/ml TE 溶解抽提好的质粒,都可以降低 RNA 残留,但都不能彻底去除。

3、蛋白质的去除,主要是靠不溶解的 K-SDS-蛋白质复合物的形成。虽然将中和后的体系置于 4C 一段时间,可以形成更多的该不溶复合物,从而使蛋白质残留更少,但实践证明这样做并不是必须的,除非是大量抽提。

首先,质粒的提取可分为质粒小提、质粒中提、质粒大提。目前大多数实验室都选用试剂盒进行提取,可以根据实验的不同需求,选择相应的试剂盒。

质粒小提主要用于用于大肠杆菌中质粒DNA的小量提取,获得的质粒可以用于常规的载体构建,一般适用于5ml以下菌液。

而质粒中提,在小提的基础上可以进一步去除菌液中的内毒素,获得的质粒可以用于细胞转染,常规需要菌液量为10-15ml。质粒大提与中提方法相同,可一次抽提100ml-300ml菌液获得大量质粒。


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