实验室分析方法--高效液相色谱分离模式的选择
高效液相色谱拥有众多分离模式,建立液相色谱分离方法的第一步即是根据样品种类选择合适的分离模式。理论上,任何一种化合物的性质都可以构建相应的分离模式。图1所示为一个蛋白质分子。根据其分子量、帯电性质、生物活性、溶解性能等性质,可以分别构建凝胶色谱、离子交换、亲和色谱、反相色谱等分离模式,用于其与其他化合物的分离
一、分离模式的选择
样品的性质不同、分离的目的不同,所选择的分离模式和所发展的对应的分析方法也不同。图2给出了基于样品的一般性质选择分离模式的基本原则。
图1 蛋白质分子的性质
图2 基于样品的一般性质选择分离模式的基本原则
二、洗脱溶剂的特征
高效液相色谱中,不同分离模式通常需要选择相应的洗脱溶剂。当以溶剂作为质子给予体、接受体以及其偶极相互作用强度组成一个三角形坐标时,可发现选择性相似的溶剂分布在三角形平面中的一定区域内,从而构成选择性不同的溶剂分组。图3为溶剂选择性分组的三角形坐标,表1也列出了依据溶剂选择性分组的各种有机化合物的类型。
由表1可知,常用溶剂可分为8个选择性不同的特征组,处于同一组中的溶剂具有相似的特性。因此对某一指定的分离,若某种溶剂不能给出良好的分离选择性,就可用另一种其他组的溶剂来替代,从而可明显地改善分离选择性。
图3 溶剂选择性分组的三角形坐标
表1 溶剂选择性分组
组别 | 溶剂名称 |
Ⅰ | 脂肪族醚、三级烷胺、四甲基胍、六甲基磷酰胺 |
Ⅱ | 脂肪醇 |
Ⅲ | 吡啶衍生物、四氢呋喃、酰胺(除甲酰胺外)、乙二醇醚、亚砜 |
Ⅳ | 乙二醇、苯甲醇、甲酰胺、乙酸 |
Ⅴ | 二氯甲烷、二氯乙烷 |
Ⅵa | 磷酸三甲苯酯、脂肪族酮和酯、聚醚、二氧六环 |
Ⅵb | 腈、砜、碳酸丙烯酯 |
Ⅶ | 硝基化合物、芳香醚、芳烃、卤代芳烃 |
Ⅷ | 氟烷醇、间甲苯酚、氯仿、水 |
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