谷氨酸脱氢酶的测定实验
基本方案
实验方法原理 |
L-谷氨酸:NAD(P)氧化还原酶(脱氨)。 L-谷氨酸+NAD(P)++H2O ⇌ 2-酮戊二酸+NAD(P)H+NH4+ 实验适用于逆反应,ADP 刺激反应进行。: |
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实验材料 | 酶样品 |
试剂、试剂盒 | 咪唑缓冲液 酮戊二酸 乙酸铵 NADH EDTA ADP |
仪器、耗材 | 分光光度计 |
实验步骤 |
实验所需「试剂」具体见「其他」 0.098 ml 实验混合物 0.02 ml LDH 稀释溶液 25℃ 时,于 340 nm 处吸收值降低。NADPH的吸收系数 ε340=6.3×103 l/(mol·cm)。
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注意事项 | |
其他 |
试剂: 0.1 mol/L 咪唑缓冲液,pH7.9(咪唑,Mr=68.1;稀释 0.68 g 于 80 ml H2O,用 1 mol/L HCl 调节至 pH7.9) 0.2 mol/L 酮戊二酸(2-酮戊二酸,一钠盐,Mr=168.1,336 mg 溶于 10 ml 水中) 10 mol/L 乙酸铵(Mr=77.1;0.77 g 溶于 10 ml 水中) 0.01 mol/L NADH(二钠盐,Mr=709.4;71 mg 溶于 10 ml 水中) 0.1 mol/L EDTA(Mr=292.2;292 mg 溶于 10 ml 水中) 0.1 mol/L ADP(二钠盐,Mr=471.2;471 mg 溶于 10 ml 水中)
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