己二醇法分离中期染色质
试剂、试剂盒：己二醇缓冲液
仪器、耗材：Dounce 匀浆器
实验步骤：
按聚胺法第 1 和 2 步中所述诱导 500 ml 悬浮或单层培养细胞为中期阻遏状态。
2. 细胞在 4℃ 1000 r/min 离心 10 分钟，用 10 ml 培养基重悬浮。
3. 将重悬浮的细胞冷却至 4℃ 放置 20 分钟。
4. 细胞在 4℃ 1000 r/min 离心 4 分钟，取出培养基。
5. 在 4℃ 用己二醇缓冲液清洗细胞，按第 4 步进行离心。
己二醇缓冲液：
1.0 mol/L 己二醇（2-甲基-2，4 戊二醇）
0.5 mmol/L CaCl2
0.1 mmol/L PIPES，pH 6.5
6. 用 10 ml 冷己二醇缓冲液温和地重悬浮细胞，37℃ 孵育 10 分钟。
7. 缓慢地将细胞悬液通过 25 号针头注射器或用 Dounce 匀浆器匀浆 10 次（避免产生过多气泡）。
8. 染色体悬液粗品用 JA-20 转头（Beclanan J-21 离心机）在 4℃ 5000 r/min 离心 15 分钟进行浓缩。
推荐
