尿中17-羟类固醇测定实验
验方法原理 尿中17-羟类固醇为肾上层皮质所分泌的激素及其代谢产物，从尿中的排出量可反映肾上腺皮质的功能，加人56％硫酸和硫酸铵促使17-羟类固醇向有机相转移，用氯仿正丁醇混合液自尿中提取。提取物加人盐酸苯肼和硫酸与17-羟类固醇生成黄色苯肼衍生物（Porter_silber反应），与标准液经同样处理比色得其含量。
试剂、试剂盒 纯化氯仿纯化正丁醇无水硫酸氨盐酸苯肼皮质醇硫酸浓盐酸
实验步骤
一、 实验试剂：
1. 纯化氯仿：250ml 2. 纯化正丁醇： 25ml
3. 无水硫酸氨：50g 4. 盐酸苯肼：65mg
5. 皮质醇标准：2ml 6. 56%硫酸：分析纯
7. 浓盐酸：分析纯
二、实验试剂配制：
1. 氯仿正丁醇混合液，按体积比10：1配制。
2. 56％硫酸：体积比
3. 苯肼-硫酸试剂：取盐酸苯肼65mg加人56%硫酸100ml加NaCL 2g 冰箱中可保存二个月。
4. 标准管：每管加0.1ml标准液置室温中干燥，盖紧放暗处保存，每次取一管使用。
三、实验测定方法：
l. 标本收集：收集24小时尿液于干洁容器内（留第一次尿应加浓HCL 5ml 防腐）量其总体积50ml样品送检。
2. 提取：取尿液3ml于50ml带塞烧瓶中，加入56％硫酸0.1ml和无水硫酸按2.5g轻摇使其溶解，加入氯仿正丁醇混合液15ml加塞振摇3分钟，将内物倒入尖底离心管内，以1500转/分离心10-15分钟，吸去上层尿液．留下氯仿正丁醇提取液备用。
3. 显色。取带塞洁净试管按下表操作：
各管用力振摇2min静止30min(或1500转/分离心15min)将上层（硫酸苯肼混合液）分别吸人洁净管内。置56℃水浴中25分钟。取出后在410nm波长用0.5cm光径比色杯，以比色空白管调零，读取各管光密度值。
四、计算：
17-羟类固醇(mg/24h)=(A-B)/C×0.02×总尿量
正常范围：男性：5-14mg/24小的尿
女性：4-14mg/24小时尿
| 注意事项 | 1. 显色反应为非特异性，葡萄糖. 果糖. Vc. 去氢Vc. 尿酸. 丙酮磺胺甲基嘧啶. 奎宁等可引起干扰。但氯仿-正丁醇混合液排除效果好，需注意尿液分离避免点滴带入显色液内。 |
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