实验分析仪器--高效液相色谱仪的进样器的相关知识
进样器
早期使用隔膜和停流进样器,装在色谱柱入口处。现在大都使用六通进样阀或自动进样器。进样装置要求密封性好,死体积小,重复性好,保证中心进样,进样时对色谱系统的压力、流量影响小。HPLC 进样方式可分为隔膜进样、停流进样、阀进样、自动进样。
1、隔膜进样
用微量注射器将样品注入专门设计的与色谱柱相连的进样头内,可把样品直接送到柱头填充床的中心,死体积几乎等于零,可以获得最佳的柱效,且价格便宜,操作方便。但不能在高压下使用(如 10MPa 以上);此外,隔膜容易吸附样品产生记忆效应,使进样重复性只能达到1%～2%,加之能耐各种溶剂的橡皮材料不易找到,常规分析使用受到限制。
2、停流进样
可避免在高压下进样。但在 HPLC 中由于隔膜的污染,停泵或重新启动时往往会出现“鬼峰”;另一缺点是保留时间不准。在以峰的始末信号控制馏分收集的制备色谱中,效果较好。
3、阀进样
一般 HPLC 分析常用六通进样阀,其关键部件由圆形密封垫(转子)和固定底座(定子)组成。由于阀接头和连接管死体积的存在,柱效率低于隔膜进样(下降5%～10%),但耐高压(35～40MPa),进样量准确,重复性好(0.5%),操作方便。
六通阀的进样方式有部分装液法和完全装液法两种。
①用部分装液法进样时,进样量应不大于定量环体积的50%(最多75%),并要求每次进样体积准确、相同。此法进样的准确度和重复性取决于注射器取样的熟练程度,而且易产生由进样引起的峰展宽。
②用完全装液法进样时,进样量应不小于定量环体积的5～10倍(最少3倍),这样才能完全置换定量环内的流动相,消除管壁效应,确保进样的准确度及重复性。
六通阀使用和维护注意事项:样品溶液进样前必须用 0.22μm 或 0.45μm 滤膜过滤,以减少微粒对进样阀的磨损;转动阀芯时不能太慢,更不能停留在中间位置,否则流动相受阻,使泵内压力剧增,甚至超过泵的最大压力,再转到进样位时,过高的压力将使柱头损坏;为防止缓冲液和样品残留在进样阀中,每次分析结束后应冲洗进样阀,通常可用水冲洗,或先用能溶解样品的溶剂冲洗,再用水冲洗。
4、自动进样
以美国的 Waters 公司和 Agilent 公司生产的液相为主,用于大量样品的常规分析,像1290型 Agilent 高效液相,最多可以进样108个样品,具有连续进样、省时省力和灵敏度高等特点。
