DNA连接酶的主要分类
T4DNA连接酶
T4DNA连接酶是ATP依赖的DNA连接酶，催化两条DNA双链上相邻的5′磷酸基和3′羟基之间形成磷酸二酯键。可接双链DNA的平末端、相容黏末端及其中的单链切口，在分子生物学中有广泛的应用。T4DNA连接酶是经原核表达，柱层析纯化获得的高纯T4DNA接酶，SDS-PAGE显示为一条62kD的蛋白条带。本品附带10xLigationBuffer含有ATP。适用于DNA片断接、克隆等各种反应。
内容与储存方法
名称:T4DNALigase数量:20ml 保存条件:-20℃
名称:10xLigationBuffer 数量:100ml 保存条件:-20℃T4DNA接酶活性为3u/ml，单位定为Weiss单位(0.01Weiss单位活性的T4DNA接酶在16℃时20ml体系反应20分钟，可以连接95%的1gλDNA-HindIII的酶切物)。无DNA外切酶或内切酶活性。可进行50次以上常规DNA接反应。低温运输，-20℃保存。有效期6个月。
10×LigationBuffer成分:
Tris-HClpH7.8600mM
MgCl215mM
DTT100mM
ATP10mM
连接条件
推荐在10~20ml反应体系中进行接反应，反应中DNA浓度最大可达1mM(1kbDNA约1mg/ml)。首先混合要接的DNA片段，加入10×LigationBuffer至终浓度为1×，再加入适量T4DNALigase混匀。最适连接温度为16℃。粘末端连接效率较高，加入0.2~1mlT4DNALigase,可在室温或16℃反应1~3小时完成反应;平末端连接效率较低，加入1mlT4DNALigase，通常需要在16℃或4℃过夜完成反应。
注意事项
1)10xLigationBuffer含有ATP，使用前应在室温放置至融化或用手掌温度辅助融化，然后置于冰上。不要加热融化以免ATP降解。
2)T4DNALigase对热敏感，容易失活。使用时请放置冰上，用后立即置冰箱中冷冻保存。
3)如需在接反应后灭活T4DNALigase，可于65℃孵育10min即可。
热稳定DNA连接酶
热稳定的DNA连接酶(thermostableDNAligase)，是从嗜热高温放线菌(Thermoactinomycesthermophilus)菌株中分离纯化的，一种能够在高温下催化两条寡核苷酸探针发生连接作用的一种核酸酶。在85℃高温下都具有连接酶的活性，而且在重复多次升温到94℃之后也仍然保持连接酶的活性。在基因克隆实验中具有重要作用。
