重組DNA的相关概念
克隆与克隆化
·DNA克隆所谓克隆就是指同一副本或拷贝的集合。获取同一拷贝的过程称为克隆化。为某一研究目的，从众多不同的分子群体中分离的某一感兴趣分子，继而经无性繁殖（扩增）产生的很多相同分子的集合，即为分子克隆。
DNA克隆就是应用酶学的方法，在体外将各种来源的遗传物质与载体DNA结合成一具有自我复制能力的DNA分子——复制子，继而通过转化或转染宿主细胞、筛选出含有目的基因转化子细胞，再进行扩增、提取获得大量同一DNA分子，即DNA克隆又称重组DNA。
工具酶
在重组DNA技术中，常需要一些基本工具酶进行基因操作。
小结：
重组DNA技术常用工具酶
（1）限制性内切酶：识别特异序列，切割DNA。
（2）DNA连接酶：催化DNA中相邻的5′磷酸基与3′羟基间形成磷酸二酯键，使DNA切口封合，连接DNA片段。（3）DNA聚合酶Ⅰ：a.合成双链cDNA中第二条链。b.缺口平移制做探针。c.DNA序列分析。d.填补3′末端。（4）Taq酶催化PCR反应，聚合DNA。
（5）反转录酶a.合成cDNA。b.替代DNA聚合酶Ⅰ进行填补，标记或DNA序列分析。
（6）多聚核苷酸激酶催化DNA5′羟基末端磷酸化，或标记探针。
（7）碱性磷酸酶切除DNA5′末端磷酸基。
（8）末端转移酶在3′羟基末端进行同系多聚核苷酸加尾。
（9）DNA酶：切割DNA（10）RNA酶：切割RNA。
在所在工具酶中，限制性核酶内切酶具有特别重要的意义。所谓限制性核酸内切酶就是识别DNA的特异序列，并在识别点或其周围切割双链DNA的一类内切酶。根据酶的组成，所需因子及裂解DNA方式的不同，可将限制性核酸内切酶分为三类。重组DNA技术中常用的限制性核酸内切酶为Ⅱ类酶，大部分Ⅱ类酶识别DNA位点的核苷酸序列呈二元旋转对称，通常称这种特殊的结构顺序为回文结构。
