硫酸链霉素的鉴别检查方法
鉴别
(1)取本品约0.5mg,加水4ml溶解后,加氢氧化钠试液2.5ml与0.1%8-羟基喹啉的乙醇溶液1ml,放冷至约15℃,加次溴酸钠试液3滴,即显橙红色。(2)取本品约20mg,加水5ml溶解后,加氢氧化钠试液0.3ml,置水浴上加热5分钟,加硫酸铁铵溶液(取硫酸铁铵0.1g,加0.5mol/IL硫酸溶液5ml使溶解)0.5m,即显紫红色(3)本品的红外光吸收图谱应与对照的图谱(光谱集491图)一致。(4)本品的水溶液显硫酸盐的鉴别反应(通则0301)
检查
酸度取本品,加水制成每1m1中含20万单位的溶液,依法测定(通则0631),pH值应为4.5~7.0。溶液的澄清度与颜色取本品5份,各1.5g,分别加水5ml,溶解后,溶液应澄清无色;如显浑浊,与2号浊度标准液(通则0902第一法)比较,均不得更浓;如显色,与各色5号标准比色液(通则0901第一法)比较,均不得更深硫酸盐取本品0.25g,精密称定,置碘量瓶中,加水100ml使溶解,用氨试液调节pH值至11,精密加入氯化钡滴定液(0.1mol/L)loml与酞紫指示液5滴,用乙二胺四醋酸二钠滴定液(0.1mol/IL)滴定,注意保持滴定过程中的pH值为11,滴定至紫色开始消褪,加乙醇50ml,继续滴定至紫蓝色消失,并将滴定结果用空白试验校正。每1ml氯化钡滴定液(0.1mol/L)相当于9.606mg的硫酸盐(SO4)。按干燥品计算,含硫酸盐应为18.0%~21.5%。有关物质照高效液相色谱法(通则0512)测定供试品溶液取本品适量,加水溶解并定量稀释制成每1ml中约含链霉素3.5mg的溶液对照溶液(1)精密量取供试品溶液适量,用水定量稀释制成每1ml中约含链霉素354g的溶液对照溶液(2)精密量取供试品溶液适量,用水定量稀释制成每1ml中约含链霉素70gg的溶液。对照溶液(3)精密量取供试品溶液适量,用水定量稀释制成每1m中约含链霉素0.14mg的溶液。系统适用性溶液取链霉素标准品适量,加水溶解并稀释制成每1ml中约含链霉素3.5mg的溶液,置日光灯(30001x)下照射24小时;另取妥布霉素标准品适量,用此溶液溶解并稀释制成每1ml中约含妥布霉素0.06mg的混合溶液色谱条件用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以0.15mol/L的三氟醋酸溶液为流动相;流速为每分钟0.5ml;用蒸发光散射检测器检测(参考条件:漂移管温度为110℃,载气流速为每分钟2.8L);进样体积10l系统适用性要求系统适用性溶液色谱图中,链霉素峰保留时间约为10~12分钟,链霉素峰与相对保留时间约为处的杂质峰的分离度和链霉素峰与妥布霉素峰之间的分离度应分别大于1.2和1.5。对照溶液(1)~(3)色谱图中,以对照溶液浓度的对数值与相应峰面积的对数值计算线性回归方程,相关系数(r)应不小于0.99测定法精密量取供试品溶液与对照溶液(1)、(2)、(3),分别注入液相色谱仪,记录色谱图至主成分峰保留时间的2倍。限度供试品溶液色谱图中如有杂质峰(除硫酸峰外),用线性回归方程计算,单个杂质不得过2.0%,杂质总量不得过5.0%。干燥失重取本品,以五氧化二磷为干燥剂,在60℃减压干燥4小时,减失重量不得过6.0%(通则0831)。可见异物取本品5份,每份为制剂最大规格量,加微粒检查用水溶解,依法检查(通则0904),应符合规定。(供无菌分装用)不溶性微粒取本品,加微粒检查用水溶解,依法检查(通则0903),每1g样品中,含10gm及10m以上的微粒不得过600粒,含25m及25m以上的微粒不得过600粒供无菌分装用)异常毒性取本品,加氯化钠注射液制成每1ml中约含2600单位的溶液,依法检查(通则1141),按静脉注射法给药,观察24小时,应符合规定。(供注射用)细菌内毒素取本品,依法检查(通则1143),每1mg链霉素中含内毒素的量应小于0.25EU。(供注射用)无菌取本品,用适宜溶剂溶解并稀释后,经薄膜过滤法处理,依法检查(通则1101),应符合规定。另取装量10ml的0.5%葡萄糖肉汤培养基6管,分别加人每1ml中含2万单位的溶液0.25~0.5ml,3管置30~35℃培养,另3管置20~25℃培养,应符合规定。(供无菌分装用)
