目标蛋白(target proteins)粗提方法-3
3）pH值 一般在被提取蛋白质的等电点的两侧，碱性蛋白用稀酸提取、酸性蛋白用稀碱提取。在某些情况下，为了破坏所分离的蛋白质与其他杂质的静电结合，选择偏酸（pH3-6）或偏碱（pH10-11），可以使离子键破坏而获得单一的蛋白成分。
4）温度 提取时通常要求低温操作。只有对某些耐高温的蛋白质或酶（如胃蛋白酶、酵母醇脱氢酶及某些多肽激素。
5）提取时常缓慢搅拌，以提高提取效率
6）有时为了破坏蛋白质与其它物质的离子键或氢键的结合，加入少量的多价阴离子也有助于蛋白提纯。
2． 有机溶剂提取
一般和脂质结合比较牢靠或分子中非极性侧链较多的蛋白质和酶，难溶于水、稀酸、稀盐和稀碱，常用有机溶剂提取。他们同时有亲脂性和亲水性，如丙酮、异丙醇、乙醇、正丁醇等。其中正丁醇应用的较为广泛，能在水和脂分子间起着类似去污剂的桥梁作用，由于丁醇与蛋白质极性基团结合的竞争力比脂质大，所以可取代蛋白质与脂质的结合位置，使原来蛋白质在水中溶解度大大增加。
有些蛋白和酶即能溶于稀酸、稀碱，又能溶于一定比例的有机溶剂。在这样的情况下，采用稀的有机溶剂提取可防止水解酶的破坏，并兼容除杂和提高提取效果的作用，现举例说明：
胰岛素可溶于稀酸、稀碱和稀醇溶液，针对组织中共存的糜蛋白酶对胰岛素有极高的水解活性，可采用68%酒精溶液并用草酸调至pH2.5-3.0,这样便能在三方面抑制了糜蛋白酶的活性：
1）68%酒精可以使糜蛋白酶暂时失活；
2）草酸可以除去激活糜蛋白酶的金属离子钙；
3）pH2.5-3.0是糜蛋白酶不适于作用的PH值。
而以上条件对胰岛素的溶解度和稳定性并没有影响，并可以除去一部分在稀酸及稀醇中不溶解的杂蛋白
垂体前叶ACTH常采用酸性70%丙酮，其设计原理是酸性可以促使ACTH的溶解，而70%浓度丙酮对ACTH的溶解度没有影响，却大幅度地降低其他杂蛋白的溶出，对提高分离纯化的效果极为明显。
3． 从细胞膜上提取水溶性的蛋白质和酶方法：
膜上的蛋白质或酶一般有两种存在方式：一种在膜表面上，与膜成分结合较松，经过充分粉碎细胞，在一定PH范围用稀盐溶液即可提取分离；一种是膜的内在成分之一，或与膜结合十分紧密，提取十分困难，需用超声波、去污剂、或其他比较强烈的化学处理，一般常用方法有如下几种：
1）浓盐或尿素等溶液提取 如NaClO4、尿素、盐酸胍等。当以上溶液浓度达到2M时，可抽去27%以上的膜蛋白，但这样的条件易引起蛋白质和酶的变性。
2）碱溶液提取 在pH8-11范围内，某些膜蛋白随着PH值的提高而溶解度大大增加，但碱提取法也容易引起蛋白酶和酶的失活，应用上不广。
3）加入金属螯合剂 蛋白质通过金属离子与膜成分结合时，加入金属螯合剂如EDTA可使蛋白质释放出来。
4）有机溶剂提取 使用乙醇、吡啶、叔戊醇、正丁醇是抽提膜上结合或内在脂蛋白最常用也最为有效的方法。如正丁醇可在广泛的PH值（3-10）温度范围内（-2- +40）内使用。
5)去垢剂处理
用去垢剂分离膜蛋白时，要考虑两点要素，去垢剂的溶解能力和去垢剂的温和性。强阴离子去垢剂，如SDS，一般具有很好的溶解性能，但温和性不够理想，容易引起蛋白质变性；弱离子型或非离子型去垢剂对蛋白变性影响较小，但溶解能力较差。根据报道，Triton
100用于提取ADP/ATP载体蛋白时，由于作用较为温和，故所得蛋白活性要高于使用其他去污剂。去垢剂的溶解能力与溶液的离子强度有关，一般说两者呈现正比关系。
