评论的淋巴细胞亚群共识（一）
最近，朋友圈里面的流式相关行业朋友都在转一条关于《流式细胞术分析外周血淋巴细胞亚群在儿科的临床应用共识》，对于流式检测来说，这确实是个值得高兴的事情。淋巴细胞亚群在流式应用中，属于最早实现标准化的应用，不管是有证试剂还是现在的应用共识，因为简单、细胞单纯、分群清楚，所以从这个应用着手开始将流式推到公众面前，是一个好机会。不过，我们也得认识到，在实际应用中，还是有不少影响标准化检测的因素，例如仪器的稳定性、标本保存的稳定性等等，并且，临床上，儿科可以与免疫缺陷进行关联，但在成人，很难解读。所以只能说，这个共识的出现，还暂时只能说：“革命尚未成功，同志尚需努力”。
其它流式应用也需要进行类似的规范化和标准化，需要大家一起努力，流式，任重道远。
顺祝FLOWER们端午安康。
《流式细胞术分析外周血淋巴细胞亚群在儿科的临床应用共识》全文
使用流式细胞术(flow cytometry，FCM)进行淋巴细胞亚群分析已广泛应用于临床，在免疫功能评估上起到不可或缺的作用。由于FCM淋巴细胞亚群分析涉及多个参数，且各参数间关系复杂，如何有效解读、判断分析结果，并指导临床疾病诊断、治疗，目前还缺乏统一的指导原则。为了科学、合理地将FCM淋巴细胞亚群分析应用于临床疾病的诊断、疗效监测、预后评估等环节，中国医师协会儿科医师分会风湿免疫专委会、中国医师协会儿科医师分会过敏专委会及中华医学会儿科分会免疫学组共同制定FCM分析淋巴细胞亚群临床应用建议。
一、淋巴细胞亚群分析常规检测项目和报告内容
FCM是一种对单细胞或生物颗粒进行多参数、定量分析的技术，具有速度快、精度高、准确性好等优点。目前FCM广泛应用于基础医学与临床学科，在疾病的诊断、分型、治疗、预后及预防起到重要作用，其中淋巴细胞亚群分析是临床开展最多的检测项目。FCM淋巴细胞亚群分析指借助各种荧光染料标记的单克隆抗体测定各类淋巴细胞胞膜或胞内独特的分化抗原(cluster of differentiation，CD)，对淋巴细胞的各个亚群进行分析。
常规检测的淋巴细胞亚群包括T细胞(CD3＋)、B细胞(CD3-CD19＋)和NK细胞(CD3-CD16＋CD56＋)；T细胞又分为两个亚群：辅助性T细胞(CD3＋CD4＋)和杀伤性T细胞(CD3＋CD8＋)。FCM淋巴细胞亚群分析报告提供各个细胞亚群细胞的相对计数(百分比)和绝对计数。
卫生部发布的FCM检测外周血淋巴细胞亚群指南(WS/T 360-2011)[1]对于规范FCM在外周血淋巴细胞亚群分析具有重要指导意义。检测过程需注意标本采集和运输、免疫荧光染色、FCM检测和分析、结果报告和审核等方面。
FCM可以直接测得各淋巴细胞亚群的相对计数。采用定量微球，用流式细胞仪单平台方法可以直接获得淋巴细胞亚群绝对计数。如果不用定量微球，可以采用FCM测定的淋巴细胞百分比，结合全血细胞分析仪测定的白细胞数量计算得到淋巴细胞的绝对计数。建议采用单平台方法进行绝对计数检测，它减轻了室间变异并避免了多台仪器间的系统误差。
二、标本采集和运输
FCM检测淋巴细胞亚群采用外周血标本。首选乙二胺四乙酸盐(EDTA-K2/EDTA-K3)抗凝管采集淋巴细胞亚群标本，肝素钠或柠檬酸钠抗凝血也可用于检测，但如标本同时进行白细胞计数分类，则应选择EDTA作为抗凝剂。
连续检测的同一患者应固定标本采集时间，标本采集后可立即检测，不能立即检测的标本应置室温保存[2]，并在24 h内检测。
三、检测对象选择
原则上免疫功能受损者均应常规评估淋巴细胞亚群。
(一)免疫防御功能受损者
易发生感染，这种感染的特点是反复、严重、多种病原体或特殊病原体的感染，以及常规治疗效果不佳的感染。
1．反复感染：感染次数和频率过高，超出正常人群，因感染的部位不同，具体反复的次数或频率难以给出参考标准[3]。
2．严重感染：严重感染包括必须进行住院静脉使用抗感染药物的患者，以及需进行重症监护和抢救的感染患者[4]。
3．多种病原体与特殊病原体感染：包括细菌、真菌和(或)病毒等多种病原体感染者；低毒病原如卡介苗、脊髓灰质炎疫苗株等的感染，对于新发现的病原体种类或病原体不清楚的感染病例尤其应该进行淋巴细胞亚群的检测[5]，有助于对疾病状况的评估。
4．常规治疗效果不佳的感染：明确病原体种类，按照常规或指南治疗，除了耐药等原因之外还可能存在宿主免疫防御的受损，应考虑及时进行淋巴细胞亚群的检测。
5．除了宿主免疫防御受损容易造成上述少见感染状况之外，感染本身也可造成继发性免疫防御受损，因此免疫评估应注意原发和继发性两方面的问题。
(二)免疫自稳和耐受功能受损者
此类患儿易发生自身免疫或自身免疫样疾病及过敏或过敏样的疾病表现。
1．过敏性疾病：
过敏性疾病是常见多发疾病，并非所有这类患者都需要进行淋巴细胞亚群的检测。对于一些严重的过敏患者应考虑淋巴细胞亚群的检测。
(1)婴幼儿时期全身严重湿疹样表现[6]。
(2)嗜酸性粒细胞显著增多[7]。
(3)血清IgE水平明显增高(IgE>1 000 IU/L)[8]。
(4)伴有反复、严重感染的患者。
2.自身免疫和自身炎症性疾病：
自身免疫性疾病患儿检测淋巴细胞亚群有助于对疾病的免疫状况及药物治疗影响的评估，以初步了解淋巴细胞各个亚群可能存在的原发性或继发性异常。
(1)存在难以控制的自身免疫反应情况及出现明显的自身免疫性淋巴增殖情况[9,10]。
(2)合并反复感染的患者。
(3)存在自身炎症反应。
(4)长期免疫抑制药物、生物制剂使用前后[11]。
(三)免疫监视功能受损者
免疫监视功能受损，主要引起机体发生肿瘤性改变。
1．血液系统肿瘤：
儿童时期最为多见的是血液系统肿瘤[12]，这种情况应常规进行淋巴细胞亚群的评估。
2．其他肿瘤及实体瘤：
其他系统肿瘤患者也应酌情进行淋巴细胞亚群的检测，既可能存在原发性淋巴细胞亚群的异常，也可能出现继发性改变，尤其是进行各种化疗时，淋巴细胞亚群大多会受到影响[13]。
(四)其他特殊情况
1．血常规中淋巴细胞明显异常[14]。
2．家族成员中有免疫缺陷病史。
3．长期使用免疫抑制剂者。
