ATCC细胞基本原理与培养的方法
ATCC细胞在体外培养时,受到非特异性有丝分裂原（如PHA、ConA）刺激后,可出现细胞体积增大,代谢旺盛,蛋白和核酸合成增加,即向**母细胞转化.**细胞转化率的高低可以反映机体的细胞**水平,因此可作为测定机体**功能的指标之一.
ATCC细胞转化试验有形态计数法、MTT 法和同位素法三种.MTT 法即四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法.MTT 是一种噻唑盐,化学名3-（4,5-二甲基-2-噻唑）-2,5-二苯基溴化四唑,水溶液为黄橙色.小鼠脾细胞受到ConA 作用后发生增殖活化,其胞内线粒体琥珀酸脱氢酶活性相应升高,MTT 作为其底物参与反应,形成蓝色的甲臜（Formazan）颗粒沉积于细胞内或细胞周围,经盐酸─异丙醇溶解后为蓝色溶液,可用酶标测定仪测定细胞培养物的OD 值,测定波长570nm.根据OD 值的大小计算反应体系中细胞增殖程度.
ATCC细胞培养常规方法：
1. 冻存细胞的复苏
应遵守慢冻快融的原则。先将水浴锅调至37-37。5度，取出冻存的细胞迅速放入后将细胞面浸至水面以下不断摇动至融化。
在无菌台内将完全培养基加入50ml的小培养瓶内，约5ml左右，然后用无菌吸管从冻存管内取出细胞，置培养并内轻轻摇晃，使细胞均匀后置培养箱内培养。
2. 传代:
对于贴壁细胞应先吸(倒)尽培养基，吸的越干净越好，以免中和后加入的消化液，使强度减弱（或PBS洗1－3次）。50ml培养瓶加入消化液约1-3ml，按此比例进行消化，(根据经验)，晃动使消化液铺均匀置37度培养箱约2-5分钟，镜下见细胞收缩变圆或少数脱落后，轻轻振动瓶底使细胞全部脱落，加入2-3ml完全培养基后，轻轻吹打，使细胞基本成单个悬浮，然后分置其它无菌培养瓶内，加入完全培养基后继续培养或实验。
一般传代可直接将细胞原液分置其它培养瓶内，加入完全培养基继续培养，如要高浓度可先离心1000rpm，5min后加入完全培养基，轻轻吹匀后，分置其它培养瓶内加入完全培养基继续培养。
贴壁细胞:
悬浮细胞:
3. 冻存
将贴壁细胞消化后离心收集，悬浮细胞直接离心收集，以完全培养基或胎牛血清重悬细胞至终浓度约106/ml。加入10%的DMSO。以每管1～2ml分装至冻存管中。用绝热材料包裹置-70摄氏度冰箱冷冻过夜。次日保存到液氮中。
