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电镜组织样品固定液的选择及其配制

2018.3.16

　　自1931世界上第一台电子显微镜诞生以来，微观世界的大门开放的更加广阔。目前电镜被广泛运用于各器官系统疾病的病理诊断中，除了运用在肿瘤的诊断与鉴别诊断中，用得最多的是肾脏活检和某些皮肤疾病的诊断，其中透射电子显微镜是最早，最广泛应用于医学领域的一种电镜。随着电镜在医学上的应用，人类通过观察细胞膜和细胞浆内的各种细胞器和细胞核的细微结构及其病理变化，由此产生了亚细胞结构病理学（substructural pathology），又称超微结构病理学（ultrastructural pathology）。

电子显微镜

　　下面主要介绍电镜生物样品固定液的选择及其配方：
　　1、缓冲液的配制
　　在配制固定液之前，应先配制缓冲液。
　　0.2M磷酸缓冲液的配制：
　　磷酸二氢钠（NaH2PO4.H2O） 2.6g
　　磷酸氢二钠（Na2HPO4.12H2O） 29g
　　重蒸馏水加至500ml
　　调pH至7.4
　　2、（灌注）固定液的配制
　　4%多聚甲醛：用0.2M磷酸缓冲液配制，重蒸馏水补足容积。
　　4%多聚甲醛+（0.5-2%）戊二醛，以4%多聚甲醛+1%戊二醛为例，配方如下：
　　0.2M磷酸缓冲液的配制 100ml
　　25%戊二醛（电镜专用） 4ml
　　重蒸馏水加到200ml
　　多聚甲醛和戊二醛混合固定液配制方法：
　　（1）4%多聚甲醛+5%戊二醛：溶解2g多聚甲醛于25ml双蒸水中，80℃水浴，摇动使之溶化后加1-3滴1M NaOH，使溶液澄清。冷却后加10ml 25%戊二醛，再加15ml 0.2PB，调pH备用。此固定液中含多聚甲醛4%，戊二醛5%，属高渗液，但固定效果不错，尤其对细胞内的微管保存较好。
　　（2）2%多聚甲醛+2%戊二醛：溶解1g多聚甲醛于25ml双蒸水中，80℃水浴，摇动使之溶化后加1-3滴1M NaOH，使溶液澄清。冷却后加4ml 25%戊二醛，再加21ml 0.2PB，调pH备用。常规固定选用这种配方。
　　（3）4%多聚甲醛+0.5%戊二醛：溶解2g多聚甲醛于25ml双蒸水中，80℃水浴，摇动使之溶化后加1-3滴1M NaOH，使溶液澄清。冷却后加1ml 25%戊二醛，再加24ml 0.2PB，调pH备用。推荐用作免疫电镜标本固定剂，对于抗原较强的标本，可将浓度降低到2%多聚甲醛+0.25%戊二醛。