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细胞系的 DNA STR 谱_用SGM Plus®进行扩增

2019.4.05
实验材料

SGM Plus® PCR 混合物的各种成分

试剂、试剂盒

纯无菌水

仪器、耗材

热循环仪

实验步骤

1. 参照 ABI 的操作步骤,为待扩增样品准备足量的混合物,每个样品管包含:

(a) AMPF/STR®PCR 反应混合物 21 μl

(b) AMPF/STR®SGM Plus®引物一套 11 μl

(c) Amplitaq gold®DNA 聚合酶 1μl

2. 从每个样品管吸出 30 μl 混合物,或加到单个大 PCR 管中,或加到薄壁微滴定板中,用黏性薄片封板。

3. 从冰箱取出样品,待融化。

4. 混匀样品,甩下管中内容物。

5. 加约 1 ng DNA 到已有适量 SGM Plus® PCR 混合物样品管中,加适当体积的无菌纯水(如 Sigma 组织培养用水)至终体积 20 μl。

6. 同时扩增一个已知基因,作为对照(如作为试剂盒的对照)。

7. 将样品管置热循环仪(如 ABI9700)上,已设定了适当的循环细节的程序,如下,开始运行:

(a)95°C 保持 11 min ± 5s。

(b)94 ± 1°C 保持 1 min ± 2s。

(c)59 ± 1°C 保持 1 min ± 2s。

(d)72 ± 1°C 保持 1 min ± 2s。

8. 重复步骤 7b 到 7d28 次。

9. 60 ± 1°C 保持 45 min ± 5s。

10. 4°C 保温至需要时。


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