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黄曲霉毒素及其检测方法综合介绍（二）

2020.6.08

七、黄曲霉毒素检测——“免疫亲和柱法”方法简介

为了开发一种简单、快速、灵敏、准确的分析方法,美国 VICAM(维康)公司与哈佛大学、麻省理工学院、约翰－霍普金斯大学、AOAC、FDA、FGIS、美国农业部等著名大学和政府机构通力合作，发明研制了一系列以单克隆免疫亲和柱为分离手段，用荧光计、紫外灯作为检测工具的分析方法。

该项技术有一下特点：

1、认证机构广泛，通用性强（见第六项）

2、分析速度快，一个样品只需 10－15分钟，其他传统的方法要做到定量分析需要几小时至几天的时间。

3、灵敏度高，测定范围广泛（0－300ppb）,用荧光计可以测定 0.1ppb 的黄曲霉毒素 M1，用 HPLC可以检测出 10ppt 的黄曲霉毒素 M1。

4、采用单克隆免疫技术，可以特效性地将黄曲霉毒素和其他真菌毒素分离出来，分离效率和回收率高，正确性和可靠性强。

5、仪器轻便容易携带，自动化程度高，操作简单，直接读出测试结果，对实验操作人员要求不高，可以在小型实验场所使用。

6、不需要剧毒的黄曲霉毒素和其他真菌毒素标准物来标定，所以在整个实验过程中，绝对安全可靠。目前，美国花生农场主、加工厂、官方检测机构 90%以上均采用维康技术分析黄曲霉毒素，维康技术在全世界 110 个国家和地区得到了广泛的应用。

在中国的典型用户有：检验检疫系统（山东、威海、日照、临沂、石岛、潍坊、天津、塘沽、河南、辽宁、大窑湾、锦州、唐山、北京、汕头、安徽、上海、厦门、平凉、岚山、湖北、广州、珠海），CDC（北京、上海）、质检系统（上海、山西、潍坊、淄博、西安、哈尔滨），国家饲料检测中心（北京）、国家粮油检测中心（北京）、成都粮科所、天津农科院、农业部农产品检测中心（新疆）、上海兽医站、李锦记（广东）、辽宁粮油外贸、山东华盛、东海粮油、安徽弘安、长生植物油、宏大油脂、文登粮油、文登昆俞、日照东方、日照东盛、日照中谷粮油、日照粮油、日照东粤、日照亚泰、五莲粮油、兴安粮油、莒县山孚、莒县粮食局、日照海纳、日照盛康、莒县春园、烟台平孚、烟台枫林、烟台金陵、水道粮管所、烟台大成、烟台大江、烟台新瑞、烟台天府、烟台澳华、招远粮油、莱阳鲁花、荣成副食品、中孚粮油、威海正昌、宏昆食品、威海华隆、威海黄海、润德粮油、青岛佳安、青岛佳德、青岛佳景、青岛东方、青岛兴华、青岛金华、青岛锐盛、青岛盛德、莱西花生、莱西松旺、胶州恒升、

胶州供销、临沂裕隆、莒南花生协会、莒南优盛、莒南正大、莒南四海、沂水宝盛、临沂天望、临沂绿地、临沂中盛、诸城粮油、诸城供销、安丘外贸、唐山南光、唐山天申、廊坊普瑞纳、镇江嘉吉、嘉兴嘉吉、上海味好美、同仁堂等，（烟台、济南、广东、宁波、吉林、山西、黑龙江、河北、江苏、淮安、福建和甘肃检验检疫局、SFDA、上海药检、深圳南山 CDC、广东 CDC、上海 SGS、医科院药植所、天津雀巢、商检所、浙大饲料所、大连质检、辽宁质检、临沂质检、日照质检、青岛通标、青岛嘉里、河南农科院、湖北绿色产品检测中心使用的是亲和柱+HPLC法）。

可以检测的样品包括：大米、面粉、酱油、植物油、醋、牛奶、奶制品、花生、花生酱、花生油、核桃、胡桃、杏仁、咖啡、玉米、蜂蜜、谷物、高粱、大豆、酱、蔬菜、胡椒、辣椒、中药材、烟草、啤酒、小麦、棉籽、燕麦、饲料等。

八、可以测试的其他真菌毒素

该种方法适用广泛，利用同一台仪器和相似的分析方法还可检测出赭曲霉毒素，伏马毒素、玉米赤霉烯酮、呕吐毒素、T-2 毒素及橘青霉毒素等。

快速、准确的检测食品中的真菌毒素

黄曲霉毒素免疫亲和柱分析法(IAC-AFLATEST)是美国维康(Vicam)公司的ZL技术,1994 年被AOAC(美国公职分析化学家协会) 批准为最新的官方方法(编号为：991.31)，同时，它也是美国农业部联邦谷物检测中心(证书编号为：FGIS91-103-13),IUPAC(国际纯粹与应用化学协会)US-FDA(美国食品药品行政署)和 USDA(美国农业部)认证的官方方法.经山东商检局科技工作者的努力,黄曲霉毒素免疫亲和柱分析法(IAC-AFLATEST)已经被制定为中国出入境检验检疫局(CIQ)新的行业标准。

以前，黄曲霉毒素分析一般采用薄层色谱法(TLC)、高效液相色谱法(HPLC)和酶联吸附免疫法(ELISA)。TLC 虽然简便，但灵敏度差；HPLC 虽然灵敏度高，但样品处理烦琐，操作复杂，仪器昂贵.ELISA 重复性差试剂寿命短需要低温保存。此外，这些方法都有共同的不足之处：

（1）在操作过程中，需要使用剧毒的真菌毒素作为标定标准物，有对操作人员造成巨大沾污的危险。

（2）在对样品进行预处理过程中，需要使用多种有毒、异味的有机溶剂，不仅毒害操作人员，而且污染环境。

（3）操作过程烦琐、时间长，劳动强度大。

（4）仪器设备复杂、笨重，难以实现现场快速分析。

（5）灵敏度较差，无法满足欧盟等国的标准要求。

为了开发一种简单、快速、灵敏、准确的分析方法,美国维康(Vicam)公司与哈佛大学、麻省理工、约瀚-霍普金斯大学、AOACFDA、FGIS、美国农业部等著名大学和政府机构通力合作，研制发明了一系列的以单克隆免疫亲合柱为分离手段,用荧光计,紫外灯作为检测工具的分析方法.维康技术具有如下特点:

1) 是 AOAC(美国职业分析家协会)、IUPAC(国际纯粹与应用化学协会)、USDA-FGIS(美国农业部联邦物谷检测中心)、USDA-GIPSA(美国农业部谷物检测、包装、贮存行政署)认证的官方方法，其检测结果在世界各地均能得以认可。

2) 分析速度快，一个样品只需 10-15 分钟，而其它传统方法均需要几个小时至几天时间。

3) 灵敏度高，测定范围宽(0.1-300ppb)，用 HPLC 检测可以测定 10ppt 的黄曲霉毒素 M1。

4) 采用单克隆抗体免疫技术,可以特效性地将黄曲霉毒素或其它真菌毒素分离出来,分离效率和回收率高,正确性和可靠性强。

5) 仪器设备轻便容易携带,自动化程度高,操作简单,直接读出测试结果,高中文化水平者即可胜任,可以在小型实验室或现场使用