新生大鼠、新生小鼠及鸡胚背根神经节分散细胞培养
背根神经节（DRG）细胞起源于神经嵴，NGF Levi-Montalcini的实验表明，外原性NGF能刺激DRG细胞生长发育并形成广泛的神经网络。在体外，分离培养的神经节在NGF存在的情况下，神经突起的生长在一天之内可长达数毫米，因此，利用培养的DRG细胞，进行轴突生长发育的研究，是最为经典而常用的方法之一。二氧化碳培养箱是通过对周围环境条件的控制制造出一个能使细胞/组织更好地生长的环境，条件控制的结果就会形成一个稳定的条件：如恒定的酸碱度（pH值：7.2-7.4）、稳定的温度（37°C）、较高的相对湿度（95％）、稳定的CO2水（5％）。因此，动物细胞的培养少不了用它。
1、材料和方法
取新生一天的大鼠(wistar种)和小鼠(昆明种)。用眼科剪在无菌条件下除去背部皮肤, 然后剪取一段脊髓,背侧朝上置于灭菌毛玻璃片上,在解剖显微镜下沿椎管两侧水平剪除腹侧一半椎骨,暴露脊髓和神经节,用解剖镊分离出神经节。鸡胚背根神经节的取材方法同前。 剥除神经节被膜, 用0.125%胰蛋白酶消化(37℃ 30min)分散后用种植(Plating)培养液稀释成0.2×105 个细胞/ml密度的细胞悬液，接种于涂有鼠尾胶的35mm塑料培养皿中,每皿2ml细胞悬液置。置标本于二氧化碳培养箱中培养。24h后倾去培养皿内种植培养液，改用饲养(Feeding)培养液培养。接种第3d, 在培养皿中分别加入细胞分裂抑制剂5-氟-2'-脱氧尿苷15μg/ml和尿苷35μg/ml以抑制非神经细胞的增殖, 作用48 h后更换新鲜饲养培养液，以后每周换液两次, 每次更换一半新鲜饲养培养液。
2、培养液成份
种植培养液：80%Eagle's DMEM(含葡萄糖600mg/100ml、NaHCO3 3.7g/L)；10%胎牛血清；10%马血清；NGF 20ng/ml；谷氨酰胺100μg/ml。脱氧核糖核酸酶 I 40μg/ml。
饲养培养液: 95%Eagle's DMEM(含葡萄糖600mg/100ml、NaHCO3 3.7g/L,)；5 % 马血清；NGF 20ng/ml；神经营养素 1ml/100ml；谷氨酰胺100μg/ml。
3、新生大鼠背根节神经元的生长分化和形态特征
新生大鼠背根节神经元接种后4h，大部分细胞可贴壁，呈圆形或椭圆形,直径8-14μm, 胞体周围呈现一圈光晕。神经元的细胞核位于中央或偏于胞体一侧，核仁明显，亦可见双核神经元。接种后24h，大部分贴壁细胞开始长出突起。其中多数为具有多个突起的多极神经元，少数为双极和假单极神经元，突起细长，并可观察到突起末端的生长锥。除单个散布的神经元外，还常见到几个或多个神经元聚集在一起，它们向四周发出树枝状的神经突起。 培养2-3d后神经元的突起逐渐增多并延长，形成稀疏的神经网络。随着培养时间的延长，神经元突起的主干和分枝明显延长并增粗，神经突起网络变得更加稠密，神经元胞体逐渐增大。大鼠背根节神经元可在二氧化碳培养箱维持培养2个月。
4、新生小鼠背根节神经元的生长分化和形态特征
新生小鼠背根节神经元的形态结构和生长分化基本上与新生大鼠相似，但小鼠背根节神经元的胞体较大鼠稍小。神经元亦随着培养时间的延长而逐渐增大。小鼠背根节神经元亦可在二氧化碳培养箱维持培养2个月。
5、鸡胚背根节神经元的生长分化和形态特征
鸡胚背根节神经元的生长分化基本上亦与新生大鼠和小鼠相似。但鸡胚背根节神经元以假单极为多见。 与大鼠或小鼠背根节培养神经元相比，神经突起分枝较少。神经元胞体稍小，神经元亦随着培养时间的延长而逐渐增大。鸡胚背根节神经元亦可维持培养2个月。
