高速逆流色谱分离纯化丰城鸡血藤中刺芒柄花素
摘 要：目的：确定高速逆流色谱分离制备高纯度丰城鸡血藤黄酮类物质刺芒柄花素的条件。方法：利用高效液相色谱测定刺芒柄花素在两相溶剂体系中的分配系数K 值，通过K 值优化确定高速逆流色谱分离的两相溶剂体系，并测定刺芒柄花素的纯度。结果：用于高速逆流色谱分离的两相溶剂体系为：正己烷- 乙酸乙酯- 甲醇- 水(4 :5 :4 :5 ，V/V) ，体系的上相为固定相，下相为流动相。高速逆流色谱分离条件为：流速2mL/min ，转速800r/min，检测波长260nm，温度26℃。从鸡血藤乙醚提取物中可一步纯化得到活性成分刺芒柄花素，得率为16.1%，高效液相色谱检测其纯度达96.3%。结论：该溶剂体系分离结果可靠，可作为高效快速分离纯化刺芒柄花素的制备分离方法。
关键词：丰城鸡血藤；高速逆流色谱；刺芒柄花素；高效液相色谱
丰城鸡血藤(Millettia nitita var．hirsutissima)为豆科类植物，别名过山龙、毛豆结藤、猪婆藤、香花崖豆藤、弟氏崖豆藤、下巴豆，为江西中药特产。其根入药，性味微甘、苦、温，能行气活血，用于治疗月经不调、血虚萎黄、麻木瘫痪、风湿疼痛等症。黄酮类化合物为其主要生物活性物质，且多为异黄酮，具有较高药用价值[1-2]。天然植物中的黄酮类化合物的分离和分析方法很多，有梯度pH 值萃取法、铅盐沉淀法、柱色谱法、薄层色谱法、气相色谱法、高效液相色谱法、超临界流动萃取等。现代仪器分离法能快速对复杂成分进行精分离，得到高纯度物质。作为先进的现代仪器分离方法，高速逆流色谱( h i g h - s p e e dcounter-current chromatography，HSCCC)用于分离天然
植物中的活性成分越来越受到重视。
HSCCC 是20 世纪80 年代期发展起来的一种液液分配色谱分离技术。由于不使用固态支持介质，避免了因不可逆吸附引起的样品损失、失活变性等现象，具有样品无损失、无污染、高效、快速和大制备量分离等优点，高速逆流色谱法已广泛应用于天然产物化学成分的分离[3-4]。流体动力学中有一种特殊的动力学平衡现象，即单向流体动力学平衡现象，在这样的动力平衡体系中，两种互不混溶的溶剂相在转动螺旋管中单向地分布。HSCCC 就是利用这种现象，让色谱仪中的螺旋管做行星运动，由于重力及螺旋管力的作用，固定相移向螺旋管的入端，使得固定相得以保留，同时两相溶剂在螺旋管中得以混合。由于各溶质在两种互不相溶的溶剂系统中分配系数不同，从而得以分离[ 5- 8]。
目前，采用HSCCC 法分离丰城鸡血藤提取物中生物活性物质的研究还未见报道。本研究旨在选择分离丰城鸡血藤黄酮类物质最佳的HSCCC 溶剂体系和操作条件，利用高效液相色谱( h i g h p e r f o rma n c e l i q u i dchromatography，HPLC)来测定两相溶剂体系中各组分的分配系数K 值，运用高速逆流色谱技术分离纯化丰城鸡血藤中刺芒柄花素。
