制备型高速逆流色谱分离纯化香菇多糖
摘 要 利用高速逆流色谱仪, 研究了双水相系统对香菇多糖的分离。溶剂系统为w ( PEG1000 ) ∶
w (K2HPO4 ) ∶w (KH2 PO4 ) ∶w (H2O) = 0. 5∶1. 25∶1. 25∶7. 0,在转速为500 r/min,流速为1. 5 mL /min的条件下,成功分离了香菇多糖粗品(700 mg) ,得到LenⅠ (95 mg) 、LenⅡ (45 mg)两个组分。用Sephadex G2100凝胶色谱柱检测纯度,结果显示: LenⅡ为单一峰,凝胶渗透色谱法测定; LenⅡ分子量为293 kDa;经酸水解后液相色谱分析表明,其单糖组成为葡萄糖和甘露糖,摩尔比为2. 7∶1; 红外光谱显示其具有多糖类的特征吸收峰。
关键词 香菇多糖,高速逆流色谱,双水相系统\
香菇中的营养成分主要是蛋白质和多糖。现代研究结果表明,香菇多糖具有抑制肿瘤、提高免疫功能、抗病毒和抗氧化等多方面的药理活性,且毒副作用很小[ 1, 2 ] 。因此,香菇多糖的分离纯化及其药理作用研究已成为一个热点课题。目前香菇多糖制成针剂已在日本生产并外销,但因工艺复杂,收率低,成本高[ 3 ] 。因此,研究开发一种产率高、成本低、能扩大到工业生产的香菇多糖纯化技术非常必要。
高速逆流色谱(HSCCC) 技术是一种无固体载体的连续液2液分配色谱技术,其固定相通过重力场和离心力场作用被保留在分离柱内, 避免了固体载体与样品发生化学反应而变性及不可逆吸附,样品回收率高,可从粗制样品中在规模制备高纯度单体化合物,已广泛用于生化工程、医药、天然产物、食品等领域[ 4～11 ] 。
通常,逆流色谱分离天然产物时,基本局限于有机相/水相溶剂体系。有机溶剂通常不能溶解生物大分子或使生物大分子发生不可逆的结构和性质改变。因此,逆流色谱在多糖、蛋白的分离中的应用不多。近年来, 随着双水相体系的开发, 使得逆流色谱在多糖、蛋白的分离上显露出很大的潜能。Shinomiya等[ 12 ]用4. 0% (w /w ) PEG 800025. 0% (w /w ) Dextran T500的磷酸钾缓冲液(pH 7. 0)成功分离了溶菌酶和肌血球蛋白; Shibusawa 等[ 13 ] 用16% (w /w ) PEG 1000212. 5% (w /w ) 磷酸钾缓冲液(pH 8. 0)成功地分离了蛋清中的3 种糖蛋白; Chao 等[ 14 ] 用12. 5% PEG 100028%磷酸钾缓冲液(pH 6. 8)成功地分离了Achyranthes bidentata中的多糖。可以预见,逆流色谱在多糖的分离上会带来技术上的革新。本研究利用高速逆流色谱的优越性,采用双水相溶剂系统对香菇多糖粗品进行了分离纯化。
