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恶性肿瘤病人外周血免疫指标的流式细胞仪检测

2019.9.30

恶性肿瘤病人外周血免疫指标的流式细胞仪检测及免疫治疗前后免疫功能变化的研究

恶性肿瘤的发生、发展与机体免疫系统密切相关。运用流式细胞术的方法，检测T淋巴细胞表面抗原（CD₃、CD₄、CD₈），B淋巴细胞表面抗原（CD₁₉、CD₂₀），NK细胞表面抗原（CD₁₆₊₅₆）在恶性肿瘤病人外周血中的表达，并检测活化T、B、NK淋巴细胞的免疫指标（CD₃/HLA-DR、CD₃/CD₂₅）的变化，探讨淋巴细胞在肿瘤中的表达状况及其意义，并进一步分析恶性肿瘤病人免疫治疗前后的免疫功能改变，以致使我们更深一层认识肿瘤在细胞水平的免疫功能。

1、资料与方法

1.1 研究对象 2003年8月～2004年5月本院肿瘤科病房50例恶性肿瘤病人，均经病理确诊，其中肺癌23例，肝癌6例，乳癌4例，胃癌5例，胰腺癌2例，淋巴瘤4例，结肠癌3例，鼻咽癌1例，肾癌2例。男28例，女22例，年龄29～65岁，平均57岁。其中10例（肺癌6例，淋巴瘤4例）年龄29～53岁，平均41岁，经免疫增强剂（高聚生4ml静滴，每日1次，共3个月；白介素Ⅱ30万U皮下注射，每周2次，共3个月）治疗一疗程（3个月）后，复查一次。

对照组31例为健康体检者，男18例，女13例，年龄36～50岁，平均43岁，其中年龄和性别构成比与病人组差异无显著性（P＞0.05）。

1.2 材料与仪器小鼠抗人单克隆抗体CD₄/CD₈/CD₃、CD₁₉、CD₂₀、CD₃/CD₁₆₊₅₆、CD₃/HLA-DR、CD₃/CD₂₅及同型对照、红细胞裂解液（Optilyse C）均为法国Immunotech公司出品。流式细胞仪（Epics XL·MCL）是美国BECKMAN COULTER公司生产。

1.3 研究方法使用直接免疫荧光标记全血溶血法，流式细胞仪测定肿瘤病人外周血淋巴细胞表面抗原表达。
　　1.3.1 淋巴细胞表面标记取荧光标记单克隆抗体CD₄/CD₈/CD₃、CD₃/CD₁₆₊₅₆、CD₃/HLA-DR、CD₃/CD₂₅、CD₁₉、CD₂₀各10μl放入试管中，分别加入外周全血100μl，室温避光孵育15min。并作同型对照。
　　1.3.2 溶血加入Optilyse C500μl，混匀，室温避光10min。
　　1.3.3 洗涤离心（1500r/min）5min，弃去上清液，加入PBS液1ml，混匀。重复洗涤1次。
　　1.3.4 重悬加入1ml PBS，混匀，制成单细胞悬液。
　　1.3.5 检测上机，每个样品检测5000个以上细胞，用FCM软件分析，计算淋巴细胞中各标记细胞的百分率。最后所有数据应用SPSS进行统计学处理。