外泌体LncRNA帮助免疫细胞“叛变”——乳腺癌恶化新机制 2
5.肿瘤缺氧微环境中乳酸在TAM中上调LncRNA
通过生信软件预测LncRNA HISLA基因启动子区域与转录因子PU.1有典型结合位点。接着，借助ChIP qPCR实验证实两者是直接结合的。作者又发现LncRNA HISLA在TAM中的表达量远高于其他巨噬细胞MDM，已有研究表明MDM“策反”为TAM细胞期间，细胞中性粒细胞集落刺激因子和乳酸会差异表达，检测后发现导致LncRNA HISLA上调的主要原因是乳酸。更有趣的是，作者在TAM中发现HIF-1α表达量与LncRNA HISLA相关，并且LncRNA HISLA能够影响有氧糖酵解的生理表型。总的来说，乳酸在肿瘤缺氧微环境中起正反馈作用。
6. HISLA通过干扰PHD2与HIF-1α结合从而维持HIF-1α稳定
当乳腺癌细胞与TAM或TAM外泌体共培养时，细胞的羟甲基化和退化都收到了抑制，而此过程可能与HIF-1α的羟甲基化和退化有关。RNA pull down和RIP实验证实LncRNA HISLA与PHD2（HIF-1α的羟甲基化和退化指示蛋白）是直接结合的关系。Fish实验证实两者主要结合在细胞质。
7. LncRNA HISLA与乳腺癌糖代谢和化疗耐受相关
为验证本次研究成果与临床的相关性，作者以453个乳腺癌患者为样本，检测LncRNA HISLA表达量与肿瘤糖代谢关键基因（GLUT1，GLUT3，HK2）以及TAM的marker：CD68抗原。结果显示LncRNA HISLA在TAM中广泛表达，检出率为33%，同时表达量与TAM的浸润面积相关。重要的是，LncRNA HISLA在患者血液外泌体和组织样本中表达量相关，且都与TAM相关。表明在乳腺患者体内的TAM通过抑制LncRNA HISLA表达，从而增强肿瘤糖酵解过程。另外，作者将LncRNA HISLA表达情况与临床病理关联，发现高表达组与疾病的分级、分期、淋巴结转移及HER2亚型相关。并且表达量与GLUT3高表达，患者较差生存情况相关。总的来说，LncRNA HISLA在乳腺癌化疗耐药方面可作为理想的分子标志物。
总结：
本文首先通过外泌体LncRNA测序证实TAM通过分泌外泌体中LncRNA促进乳腺癌细胞糖酵解过程。借助分子间相互作用的机制实验，如RNA Pull Down，RIP，ChIP等证实LncRNA HISLA可通过结合PHD2蛋白从而维持HIF-1α稳定。同时，癌细胞分泌乳酸对TAM中LncRNA HISLA具有上调作用，从而形成了正反馈。临床大样本数据结果证实LncRNA HISLA在TAM中表达，并且与乳腺癌患者糖酵解、化疗效果差异和生存期长短相关。总的来说，本研究发现了肿瘤细胞分泌细胞外囊泡所携带LncRNA具有促进肿瘤糖酵解作用。
