血清钙检查的注意事项
一、甲基百里香酚蓝比色法(MTB)：
(1) MTB与EDTA有相似的氨羧结构，能螯合多种阳离子，但络合稳定常数不同。
(2) 加入：EDTA的作用，目的在于掩蔽试剂中污染的钙以及其他的金属离子。能降低空白管吸光度，提高测定管吸光度，从而使方法灵敏度提高。
(3) EDTA的用量选择，绝大部分金属离子与EDTA的络合稳定常数大于钙，小于钙的仅是少数微量元素。限量的EDTA仅能掩蔽试剂中的干扰元素，没有多余的EDTA络合血清钙，一般加入配试剂中的浓度EDTA99-108μmol/L，最终络合显色反应的EDTA浓度50-54μmol/L。
(4) 所用的试管清洗后用去离子水浸泡两次，再烤干备用。清洁管加入试剂后应显一致的浅灰绿色，若显蓝色则试管表示有钙污染。
二、邻甲酚酞络合酮直接比色法：
(1) 本测定用血清或肝素抗凝血浆标本。不能用钙螯合剂(EDTA-Na2)及草酸盐作抗凝剂的标本。
(2) 邻甲酚酞是一种酸碱指示剂，在结构上与甲基百里香酚蓝相似，在中性或酸性环境中无色，仅在碱性溶液中和钙离子络合呈紫红色。所以pH对显色有很大的影响，在pH10.5-12时，此反应敏感性最好，故用pH11为宜。
(3) 试剂中加入8-羟基喹啉消除镁的干扰，能特异地络合镁，TritonX-100具有消化蛋白的影响。有的作者，在试剂中还加入氰化物掩蔽其他金属离子；二甲亚砜消除蛋白影响及抑制邻甲酚酞络合物的解离，从而降低空白液的吸光度；聚乙烯吡咯烷酮亦能消除蛋白质、胆红质及磷的干扰。
(4) 用来作血清钙测定的碱性缓冲液较多，可根据条件选用，常用的有乙二胺-氰化钾、乙二胺-醋酸钾-盐酸、乙二胺-乙二醇、乙醇胺-硼酸、2-氨基-2-甲基-1-丙醇等。用乙二胺-乙二醇缓冲液测定呈色稳定。乙醇胺-硼酸缓冲容量较大，并能使空白试剂的吸光度保持较低读数。2-氨基-2-甲基-1-丙醇无毒，无刺激性，也能使空白管有较低的读数。
(5) 显色剂有时略有结晶析出，是8-羟基喹啉在水中溶解度很低，易析出结晶所致，这时可取上清液应用。
三、乙二胺四乙酸二钠滴定法：
(1) 测定标本若有黄疸或溶血时，终点不易观察，则必须将标本进行处理，首先用草酸盐将钙沉淀，再用盐酸及柠檬酸钠重溶。
① 尚需增加几种试剂：0.7mol/L草酸铵；0.05mol/L柠檬酸钠；1mol/L盐酸。
② 按下法操作：吸取血清0.1ml，置于离心管中，加去离子水0.25ml、0.7mol/L草酸铵0.05ml，混匀。置56℃水浴中15min。离心沉淀2000转/分10min。小心倾去上清液，并将离心管倒立于滤纸上吸干。加1mol/L盐酸及0.05mol/L柠檬酸钠各0.1ml于离心管中，溶解沉淀。按直接滴定法进行滴定及计算。
(2) 钙指示剂种类繁多，名称较乱，不同指示剂所显滴定终点不同，受其他离子干扰的作用也不一样，钙红指示剂终点明显，且较少受镁离子等干扰。但本身不稳定。要经常新鲜配置，加入标本内后要立即用EDTA-Na2滴定。所用钙红为钙-羧酸钠，应与乙二醛缩双邻氨基酚的别名“钙红”相区别。
四、离子钙测定：
(1) 测定离子钙最好用血清。优点不参入抗凝剂，减少蛋白对电极的污染。肝素抗凝全血亦可用于离子钙测定，尤其急需要结果减少了凝血时间和离心分离血清的时间。但过量的肝素(30u/ml)能使离子钙浓度降低3%-5%。
(2) pH改变对Ca2+影响较大。pH降低能使Ca2+增加，反之能使钙离子减少，故采到的血标本尽可能防止CO2逸出，避免pH增加。
(3) 标本应尽快测定，最好在采样后1h内完成。全血密封贮存于4℃冰箱可稳定6h或更长些时间。密封在注射器中的血清，若无气泡存在，室温可保存1-2h，4℃可保存24h以上。
(4) 离子钙含量还与下列因素有关：
① 站立能使离子钙增高约1%-2%。
② 延长静脉淤血的时间能使离子钙增加2%，淤血时前臂运动几分钟离子钙可增加8%。
③ 卧床3-12天足以使离子钙超出正常范围。
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