融合蛋白的制备方法介绍
基于重复结构的融合蛋白大多为短肽，不具有复杂的空间结构，因此只需简单的多肽合成过程即可获得目标蛋白。由单个氨基酸合成多肽主要通过两个氨基酸之间脱水形成肽键来实现，主要包括以下基本步骤:：首先对两性离子结构的氨基酸进行相应的氨基或羧基保护，其次将羧基活化为活性中间体，待耦合过程结束后，对肽链上氨基酸的保护基团选择相应的方式进行选择性的脱除或者是全脱除。目前常用的多肽合成方法为液相合成和固相合成两种。液相合成法是将所需的氨基酸配制成溶液，并对其中一个氨基酸的氨基、其余氨基酸的羧基和不参与反应的侧链基团进行化学基团保护，只活化参加反应的氨基酸的羧基，待耦合反应完成后再将没有参加反应的原料、活化剂等分离除去，得到纯化多肽产物。这种方法虽然操作繁琐，却具有目标产物纯度高的优势。而固相合成法，则是将多肽序列C端的第1个氨基酸的羧基通过酯化反应固定于不溶性的树脂上，进而以此氨基酸作为氨基组分，脱除其氨基保护基团并同过量的活化后的羧基组分耦合形成肽键，重复脱保护、缩合、洗涤过程持续合成，获得所需的肽链。合成完成后，再试用三氟乙酸将产物从树脂上切割下来，同时脱除所有保护基团，纯化回收获得所需多肽。
相对来说，具有一定空间结构且序列复杂的其他两种融合蛋白的合成过程则复杂得多。精确构建所需DNA模版是保证融合蛋白多样性及稳定性的基础。在获得目标DNA序列后，将其连接进入特定的载体之中，以获得充足融合蛋白质粒。由于遗传基因的简并性，同一种融合蛋白可对应着多种DNA序列，但序列合成蛋白效率却与扩增时选取的宿主种类有关( 大肠杆菌、酵母菌及真核细胞等) 。例如，“AAG 及AGA”片段如果出现在需要使用大肠杆菌表达体系的质粒中便会大大影响蛋白产率。重组质粒中密码子的优化还有许多影响因素，密码子偏倚、tRNA 可用性、mRNA 稳定性和mRNA 结构都在基因表达中起重要作用，而且选择DNA片段时也应尽量避免在重组基因载体中存在高度重复的部分以避免发生错配，影响mRNA 转录。
