植物体细胞杂交的融合方法介绍
1．PEG诱导融合法
PEG诱导融合的特点：其优点是融合成本低，勿需特殊设备；融合子产生的异核率较
高；融合过程不受物种限制。其缺点是融合过程繁琐，PEG可能对细胞有毒害。
PEG的作用机理： Kao等认为，由于PEG分子具有轻微的负极性，故可以与具有正极
性基团的水、蛋白质和碳水化合物等形成H键，从而在原生质体之间形成分子桥，其
结果是使原生质体发生粘连进而促使原生质体的融合；另外，PEG能增加类脂膜的流动
性，也使原生质体的核、细胞器发生融合成为可能。
融合技术要点：
融合液：CaCl2·2H2O 8~10mmol
KH2PO4 0.7mmol
甘露醇或山梨醇 0.5~1.0mol
pH 5.6
诱导液：融合液+PEG 20～45%
稀释液：A液（g/100ml）pH6.0 B液（g/100ml）pH10.5
葡萄糖7.21甘氨酸0.375
CaCl2·2H2O 0.79 NaOH 0.169
DMSO 10ml
2．电融合法
与PEG融合比较起来，电融合有三大优点：一是不存在对细胞的毒害问题；二是融合效
率高；三是融合技术操作简便。
电融合仪的结构特点：一是交变电场部分；一是高频直流电击部分。
电融合的基本过程：
细胞膜的接触：当原生质体置于电导率很低的溶液中时，电场通电后，电流即通过原生
质体而不是通过溶液，其结果是原生质体在电场作用下极化而产生偶极子，从而使原生质体
紧密接触排列成串；
P1 P2
P1 P2
混合静止1min.
融 合
融合液
加入PEG
稀 释洗 涤
加入稀释液
加入培养基
培 养
选 择
膜的击穿：原生质体成串排列后，立即给予高频直流脉冲就可以使原生质膜击穿，从而
导致两个紧密接触的细胞融合在一起。
关于融合参数：电融合中的主要参数包括交流电压、交变电场的振幅频率、交变电场的
处理时间；直流高频电压、脉冲宽度、脉冲次数等。
