免疫细胞化学技术观察细胞成分实验
实验方法原理 | 免疫细胞化学是在细胞化学技术的基础上,吸收免疫学的理论和技术发展起来的一项技术,其基本原理是用荧光素或酶等标记物或显色物标记特异性抗体,通过免疫学中的抗原抗体反应与细胞内的相应抗原结合,形成带有荧光素或显色物的抗原抗体复合物,因此可用荧光显微镜或普通光学显微镜观察到复合物的存在,达到检测细胞内抗原物质的目的。细胞免疫化学是一项综合性的技术,包括标本的准备(制备、储存、固定等)、染色方法以及结果的分析判断,非特异性染色的减轻、消除等。 |
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实验材料 | 细胞 |
试剂、试剂盒 | 福尔马林 丙酮 多聚甲醛 |
仪器、耗材 | 盖玻片 培养瓶 培养板 |
实验步骤 |
一、标本制备 将多聚甲醛40 g溶于0.1 M PBS 1000 ml,加热至60 ℃左右,边搅拌边加温至透明为止(一般需滴加少许1 M NaOH才能使溶液清亮)。该固定剂较温和,适于标本的较长期保存。
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注意事项 |
1. 活细胞标本制备好后应立即固定,以防止细胞自溶,保持其固有的组织结构,保存细胞内的抗原性,使抗原不失活,不发生弥散和保证免疫组化定位准确。标本固定后必须彻底清洗、除去多余的固定液,否则将影响免疫组化染色效果。
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项目成果