胰腺弹性蛋白酶ELISA检测试剂盒使用说明
预期用途
此BIOSERV 胰腺弹性蛋白酶ELISA检测试剂盒能用于粪便样品中胰腺弹性蛋白酶的定量检测,作为胰腺外分沁功能的辅助检测工具.
简介及临床意义
用于慢性胰腺炎, 囊胞性纤维症, 糖尿病, 舒瓦克曼综合征等疾病引起胰腺分泌不足的体外诊断. 本试剂盒能用于定量检测粪便样本中胰腺弹性蛋白酶的含量,作为胰腺分泌不足的辅助检测. 胰腺弹性蛋白酶ELISA 已经过FDA注册认证.
此BIOSERV胰腺弹性蛋白酶ELISA检测试剂盒基于’’三明治”夹心法原理, 用于胰腺外分沁不足的体外诊断.
实验原理
BIOSERV 胰腺弹性蛋白酶ELISA检测试剂盒基于’’三明治”夹心法原理, 采用2种特异性识别人胰腺弹性蛋白酶表面决定簇的多克隆抗体. 试剂盒微孔中预包被有能特异性结合样品或标准品中的胰腺弹性蛋白酶抗体. 加样后,再加入生物素标记抗体,结合到固相的胰腺弹性蛋白酶. 再加入链霉亲和素标记辣根过氧化酶结合物, 催化TMB底物液. 加入0.25 mol/l 的硫酸终止酶反应.最后在酶标仪450 nm读取其吸光度.
试剂
足够用于96人份检测
1参考标准品(即用)-每瓶 0.7 ml
-标准品1(50 µg弹性蛋白酶/g-无色盖)
-标准品2(100µg弹性蛋白酶/g-白色盖)
-标准品3(200 µg弹性蛋白酶/g-黄色盖)
-标准品4(500 µg弹性蛋白酶/g-蓝色盖)
2质控
1 (约90 µg弹性蛋白酶/g±20%-棕色盖) 0.7 ml
含0.2%叠氮化钠
3质控2 (约200 µg弹性蛋白酶/g±20%-绿色盖) 0.7 ml
含0.2%叠氮化钠
4洗涤液(10倍浓缩) 2 x 50 ml
5提取缓冲液(10倍浓缩) 50 ml
6 生物素化抗体(二抗- 红色盖) 0.12 ml
7链霉亲和素-过氧化酶结合物(即用) 8 ml
8底物液 (TMB底物液,即用) 13 ml
9终止液 (0.25 mol/l H2SO4,即用) 13 ml
10微孔反应板,包被有多克隆抗弹性蛋白抗体 96 孔
11 单条固定架
实验所需器材(但实验盒没有提供)
1带450nm过滤装置,可选550 nm.的酶标仪
2带一次性吸嘴的微移液管: 5 µl, 50 µl, 100 µl 和1000 µl.
3试管
4蒸馏水或去离子水
5吸水纸
注意事项
1试剂盒仅供体外诊断用
2避免接触终止液,终止液会刺激和灼伤皮肤
3切勿用嘴移液
4请使用标准的移液管和仪器
5小心处理样品并视其为潜在感染物质
6根据国家生物危害安全条例及规范处理及使用
存储说明及保质期
1试剂存储于2 – 8 °C (36 °F – 46 °F),避免冰冻试剂盒或其成分
2未开封的试剂盒于有效期内稳定
请注意:如果试剂盒被开封使用, 剩余未用试剂盒可能会短于标签上的有效期.所有成分在使用后都应密封保存于2-8 °C并于4周内用完. 否则可能会导致结果的差异.
3 稀释洗涤液于2 °C – 8 °C / 36 °F – 46 °F可稳定保存4周
4稀释提取缓冲液于2 °C – 8 °C / 36 °F – 46 °F可稳定保存4周
5 使用后应立即盖上盖子
6 微孔反应板应于含有干燥剂的袋子保存. 未使用的微孔反应板应重新密封于含有干燥剂的袋子中. 这种存储条件下,开封的试剂盒至少能保存4周.
样品
人粪便
样品收集及准备
1使用新鲜准备的粪便样品. 小心处理,视其为可感染物质.
2样品在不同的温度下存储的不同保质期
室温至40 °C (104 °F): 保存5天
(2 °C – 8 °C / 36 °F – 46 °F): 保存1周
(-18 °C – -20 °C / 0 °F – -4 °F): 保存1年
粪便样品准备
1提取缓冲液的准备(10倍浓缩)
用蒸馏水或去离子水按1:10的比例稀释提取缓冲液.(即50 ml + 450 ml), 稀释提取缓冲液置2-8 °C下可保存至有效期
2 粪便样品称重
-称取30–100 mg(天平灵敏度达1 mg)粪便样品置于12 ml 的试管中.再用1 ml 的稀释提取液稀释10 mg 的粪便样品.(例: 70 mg样品+7ml 稀释缓冲液,83 mg样品+8.3ml 稀释缓冲液)
-使用漩涡混合仪充分混匀.(约2分钟),待固定成分沉淀.(至少30分钟),最后取其上清液用于实验检测. 2-8 °C下过夜提取可得到最优实验结果
请注意:如果提供缓冲液或洗液液出现盐结晶,使用前于30-35 °C水浴加热混合溶解.
实验上清液可置于-18 °保存4周.
